[发明专利]基于纳米金模拟过氧化物酶的脲酶及其抑制剂的测定方法

摘要

本发明公开一种基于纳米金模拟过氧化物酶的脲酶及其抑制剂的测定方法，其特征是利用脲酶催化尿素反应体系耦合纳米金模拟过氧化物酶‑过氧化氢‑3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐催化显色反应体系，结合溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，直接用于脲酶及其抑制剂含量的测定。在1.8~90 U/L范围内，A450与脲酶浓度呈线性关系，检测限为1.8 U/L。通过软件拟合得到脲酶抑制剂乙酰氧肟酸的IC50为0.05 mmoL/L。本发明操作简便、灵敏度高，能够作为分析方法应用于环境及生命科学体系中脲酶及其抑制剂含量的测定。

主权项

一种基于纳米金模拟过氧化物酶的脲酶测定方法，其特征是将0.05 mL不同浓度的脲酶溶液和尿素溶液加入到0.5 mL浓度为10 mmoL/L，pH=6.40的磷酸缓冲液中，摇匀后37°C温浴30分钟，反应结束后，加入0.2 mL 质量分数为30%的过氧化氢溶液、0.05 mL浓度为16 mmoL/L的3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐溶液和0.10 mL纳米金溶液，混合均匀后37°C温浴10分钟，立即加入0.2 mL 体积分数为20%的硫酸溶液终止反应，测定吸光度值A450，在1.8 ~ 90 U/L浓度范围内，A450与脲酶浓度呈线性关系，检测限为1.8 U/L；所使用的纳米金采用柠檬酸三钠还原法制得：1毫升0.1 g/L的氯金酸溶液溶解于100毫升水中，回流加热煮沸后迅速加入3毫升0.1 g/L的柠檬酸三钠溶液，反应溶液由从浅黄色变成酒红色，继续回流15分钟后，将反应溶液慢慢冷却至室温，所得的纳米金粒径为13 nm，浓度为3.1 nmoL/L，4 °C保存。