[发明专利]检测细胞外基质MMP13的BRET探针、基因、表达载体和构建方法在审
| 申请号： | 201510072880.8 | 申请日： | 2015-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN104788569A | 公开（公告）日： | 2015-07-22 |
| 发明（设计）人： | 王大平;梁宇杰;段莉;李子刚 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C09K11/06;C12Q1/37;C12N15/62;C12N15/63;C12N15/66 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种检测细胞外基质MMP13的BRET探针，包括BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白，以及连接BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白的MMP13特异性识别降解的多肽底物；BRET生物发光供体为具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列的海肾的荧光素酶(Rluc8)，BRET受体荧光蛋白为黄色荧光蛋白。本发明构建的探针，自身的供体和受体蛋白之间通过可被MMP13特异性识别降解多肽底物连接产生BRET，当多肽底物被MMP13特异性识别降解之后，BRET现象消失，只能检测到生物发光供体发出的发射光，而不能检测到荧光蛋白的发射光；并且Rluc8蛋白的C端融合了含有血小板源生长因子受体的跨膜区域，因此能锚定在细胞膜的表面，可以在不损伤细胞的情况下进行活细胞外基质金属蛋白酶的检测，同时还具有更高的灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 检测 细胞 基质 mmp13 bret 探针 基因 表达 载体 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种检测细胞外基质MMP13的BRET探针，包括BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白，其特征在于，所述BRET生物发光供体和BRET受体荧光蛋白之间通过MMP13特异性识别降解的多肽底物连接；其中，所述BRET生物发光供体为具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列的Rluc8蛋白，所述BRET受体荧光蛋白为黄色荧光蛋白。
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