[发明专利]级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用有效
| 申请号： | 201510074131.9 | 申请日： | 2015-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN104651313B | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 邹汉东;于兆学;夏凡 | 申请（专利权）人： | 广州杜德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0786 | 分类号： | C12N5/0786;A61K35/15;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510000 广东省广州市海*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用，所述制备方法包括以下步骤：分离得到单核细胞；进行培养，加入CD3抗体和干扰素γ，初级刺激单核细胞，进入初级刺激孵育期，培养；加入IL‑2、IL‑4、IL‑1和巨噬细胞集落刺激因子,进一步活化培养，得到活化后的外周血单核细胞。通过上述方法得到的活化后的外周血单核细胞，可用于制备治疗乳腺癌、恶性黑色素瘤的药物。 | ||
| 搜索关键词： | 级联 激活 免疫 细胞 制备 方法 以及 应用 | ||
【主权项】：
1.一种级联激活的免疫细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分离得到外周血单核细胞；(2)分离得到的单核细胞与CD3抗体共培养2～4小时后，加入干扰素γ共培养20～24小时，初级刺激单核细胞，进入初级刺激孵育期；(3)在上述(2)步中共培养20～24小时结束后，加入IL‑2、IL‑4、IL‑1和巨噬细胞集落刺激因子,进一步活化培养70～72小时，得到级联激活的免疫细胞；步骤(2)中进行培养时单核细胞的接种密度为1～2x109/L，0.5mL/孔；所述CD3的加入量为1～2μg/孔，干扰素γ的加入量为1000～2000IU/孔；步骤(3)中，每孔中加入的所述IL‑2、IL‑4、IL‑1和巨噬细胞集落刺激因子的量分别为：1000～2000IU、100～200ng、40～60ng和300～500ng。
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