[发明专利]一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法

摘要

一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法，首先使用Ⅰ型胶原酶短时消化胎盘小叶，得到含细胞外基质蛋白和组织块组成的糊状混合物并进行原代培养；然后用第三代胎盘间充质干细胞作为滋养细胞与分离后的原代脐血间充质干细胞在低氧条件下共培养，获取大量脐血间充质干细胞。本发明利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法，缩短了胎盘间充质干细胞的培养时间，有效解决了脐血间充质干细胞纯度低、增殖能力差等问题，提高了脐血间充质干细胞培养的成功率，开发了脐血间充质干细胞的利用价值。本发明未使用胎牛血清和胰酶，提高了细胞临床应用的安全性。

主权项

一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法，包括以下步骤：步骤1、胎盘的采集及运输；步骤2、剔除胎盘的羊膜和蜕膜得到胎盘小叶；步骤3、将胎盘小叶剪切至1mm3的组织块，加入注射用水裂解红细胞并清洗；步骤4、使用Ⅰ型胶原酶消化得到细胞外基质蛋白和组织块组成的糊状混合物；步骤5、取上述糊状混合物涂抹在培养皿内晾干固定；步骤6、向上述培养皿内加入无血清培养体系进行原代培养并全量换液；步骤7、待胎盘间充质干细胞融合率达到标准时，使用细胞消化液消化收集原代细胞并进行传代；步骤8、对胎盘间充质干细胞进行细胞生物学鉴定；步骤9、收集第三代胎盘间充质干细胞接种于Transwell共培养系统的下室；步骤10、采集脐血后使用分离液对脐血单个核细胞进行提取；步骤11、收集的脐血单个核细胞接种于Transwell的上室，添加无血清培养体系培养；除去悬浮细胞并进行首次全量换液，与下室的胎盘间充质干细胞在低氧环境下共培养，收集上室的原代细胞进行传代扩增；步骤12、对扩增的脐血间充质干细胞进行细胞生物学鉴定。