[发明专利]一种利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法

摘要

一种利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法，首先使用Ⅰ型胶原酶短时消化脐带华通氏胶，得到含细胞外基质蛋白和组织块组成的糊状混合物并进行原代培养；然后在填充床式生物反应器内加入“干细胞生长培养基”用于扩增脐带间充质干细胞，当反应器内的细胞融合率达到标准时，添加“蛋白生产培养基”进行连续培养，收集培养液并处理，最终获得生物活性蛋白。本发明利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法，得到的脐带间充质干细胞纯度高，增殖能力好，缩短了干细胞培养时间；并且得到的生物活性蛋白产量高，质控过程方便，易于规模化生产。干细胞和生物活性蛋白均不含任何动物源性成分，提高了临床应用的安全性。

主权项

一种利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法，包括以下步骤：步骤1、脐带的采集及运输；步骤2、剔除脐带的羊膜和血管后得到华通氏胶并剪成组织小块；步骤3、使用Ⅰ型胶原酶短时消化得到细胞外基质蛋白和组织小块组成的糊状混合物；步骤4、取上述糊状混合物涂抹在培养皿内晾干固定；步骤5、向上述培养皿内加入无血清培养体系原代培养，经过两次全量换液，收集组织小块；步骤6、将步骤5中收集的组织小块转移至培养瓶内第二次原代培养；步骤7、两次原代细胞均在融合率达到70%时传代培养，同时收集并保存培养液；步骤8、扩增后对传代的脐带间充质干细胞进行细胞生物学鉴定；步骤9、将传代细胞接种至生物反应器内，加入预先配置的干细胞生长培养基，并采用间歇搅拌的方式促进干细胞贴壁；步骤10、待细胞完全贴壁后，连续搅拌扩增间充质干细胞；步骤11、当反应器内的细胞融合率达到80%‑85%时，逐步添加预先配置的生物活性蛋白生产培养基以替换干细胞生长培养基，培养24h后开始收集培养液；步骤12、将步骤11中收集的培养液离心，收取上清液，透析处理后获得生物活性蛋白。