[发明专利]一种脾氨肽原液的制备方法有效

专利信息
申请号: 201510079165.7 申请日: 2015-02-13
公开(公告)号: CN104644672B 公开(公告)日: 2018-08-24
发明(设计)人: 赵卿全 申请(专利权)人: 大连百利天华制药有限公司
主分类号: C12P21/00 分类号: C12P21/00;A61K38/00;A61P37/04;A61P37/02
代理公司: 大连科技专利代理有限责任公司 21119 代理人: 龙锋
地址: 116422 辽宁*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要: 发明公开了一种脾氨肽口服原液的制备方法,通过磨碎、匀浆、旋冻、融、双酶水解、高压破碎、离心超滤等步骤得到高纯度高活性的脾氨肽原液,本申请提供的脾氨肽制备方法相对于现有的方法具有如下优势:细胞破壁完全,有效成分得到全面释放;脾氨肽分子保持完整、没有分子结构变化;产品高纯度、高活性、质量均符合国家标准要求;没有大分子和小分子有害物质,可制作成高活性冻干粉或注射剂。
搜索关键词: 脾氨肽 高活性 原液 制备 高纯度 分子结构变化 国家标准要求 高压破碎 双酶水解 细胞破壁 冻干粉 小分子 注射剂 超滤 磨碎 匀浆 释放 申请 制作
【主权项】:
1.一种脾氨肽原液的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)取料、磨碎、匀浆:将新鲜的健康的动物脾脏去脂肪及缔结组织,然后磨碎匀浆;2)速冻、融化:将步骤1)得到的匀浆液速冻,速冻完成的匀浆液放入恒温箱至完全融化;反复两次;速冻温度为‑25‑‑30℃,时间为1.5‑3h;融化温度为35‑45℃;3)蛋白酶水解:将步骤2)得到的匀浆液中加入蛋白酶水解,所述蛋白酶与匀浆液的重量配比为1:60‑100,酶解温度35‑45℃;PH值为7.5‑8.0;4)高压破碎:将步骤3)酶解后的溶液放入高压细胞破碎机中破碎,高压破碎的压力为100‑110Mpa,时间0.8‑1.5h;5)核酸酶水解:将步骤4)破碎得到的溶液加入核酸酶水解,所述核酸酶与破碎后溶液的重量配比为1:60‑250,酶解温度50‑60℃;PH6.2‑6.8;时间2‑3h;6)离心、超滤:将双酶酶解后溶液放入冷离心机中离心,离心后取上清液进入超滤器超滤,所述离心机的转速为转速4000r/min,离心时间为30min;超滤截留分子量为10000;7)制备型高效液相色谱纯化:将超滤后溶液进入制备型高效液相色谱纯化,得到脾氨肽原液,所述高效液相色谱参数为:反相高效液相色谱RP‑HPLC,固定相苯烷基和氰基键合硅胶孔径100万,流动相为纯化水和缓冲液,收集分子量2000‑4000。
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