[发明专利]微生物发酵生产低温葡甘聚糖酶的方法

摘要

本发明涉及微生物发酵生产低温葡甘聚糖酶的方法，具体为将产生葡甘聚糖酶菌种活化，再经过逐级低温驯化，使菌种在低温环境中生长良好，将低温驯化后的葡甘聚糖酶产生菌在18～24℃逐级扩大培养，按发酵液体积的4～10％接种量接种于液体发酵培养基中，在18～24℃培养72～132h时，得低温葡甘聚糖酶，收集到的粗酶液根据不同需要和使用对象不同，进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。本发明生产的低温葡甘聚糖酶在低温下具有高酶活力及高催化效率，可减少加工工艺，缩短加工时间，简化生产工艺，降低生产成本，提高生产效率，改善并提高产品质量；该酶制剂应用操作简单、方便、快捷、具有更广阔的工业开发价值与市场应用优势。

主权项

一种微生物发酵生产低温葡甘聚糖酶的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)将能产生葡甘聚糖酶的菌种活化，再经过逐级低温驯化，驯化温度由高到低，24℃→22℃→20℃→18℃，使其在低温环境中生长良好，当菌种能在低温下稳定生长即驯化结束；该菌种的低温驯化培养基按重量百分比计包含：魔芋精粉0.4～1.0％，NaNO₃0.2～0.7％，MgSO₄·7H₂O 0.3～0.5％，KCl 0.3～0.5％，K₂HPO₄0.1～0.3％，FeSO₄·7H₂O 0.001～0.004％，琼脂1.8～2.0％，自来水100mL，pH 6.0～6.5，于115℃、0.1Mpa蒸汽灭菌15min；所述的能产生葡甘聚糖酶的菌种来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号：1.1918或1.439或1.440或1.460；(2)按常规方法将步骤(1)中低温驯化后的葡甘聚糖酶产生菌在液体种子培养基中于18～24℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；所述液体种子培养基按重量百分比计包含：魔芋精粉0.4～1.0％，酵母膏0.4～0.9％，蛋白胨0.3～1.0％，NaNO₃0.2～0.7％，MgSO₄·7H₂O 0.3～0.5％，KCl 0.3～0.5％，K₂HPO₄0.1～0.3％，FeSO₄·7H₂O 0.001～0.004％，自来水100mL，pH 6.0～6.5，于115℃、0.1Mpa蒸汽灭菌15min；(3)将液体二级种子按发酵液体积的4～10％接种量接入发酵产酶培养基中，在18～24℃培养72～132h时，即微生物发酵生产低温葡甘聚糖酶结束；所述的发酵产酶培养基按重量百分比计包含：魔芋精粉0.4～4.0％，NaNO₃0.2～0.7％，MgSO₄·7H₂O 0.3～0.5％，KCl 0.3～0.5％，K₂HPO₄0.1～0.3％，FeSO₄·7H₂O 0.001～0.004％，自来水100mL，pH 6.0～6.5，于115℃、0.1Mpa蒸汽灭菌15min；(4)将步骤(3)的发酵液在4000～8000rpm离心收集上清液，即为粗酶液；(5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)中得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。