[发明专利]海洋微生物发酵生产低温脂肪氧合酶的方法

摘要

本发明涉及海洋微生物发酵生产低温脂肪氧合酶的方法，具体步骤为：先将产生脂肪氧合酶菌种活化，再经过逐级低温驯化，使菌种在低温环境中生长良好，将低温驯化后的脂肪氧合酶产生菌在10～18℃逐级扩大培养，按发酵液体积3～9％的接种量接种于液体发酵培养基中，在10～18℃培养72～144h时，得低温脂肪氧合酶，收集到的粗酶液根据不同需要和使用对象不同，进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。本发明生产的低温脂肪氧合酶在低温下具有高酶活力及高催化效率，可简化加工工艺，缩短加工时间，降低生产成本，提高生产效率，改善并提高产品质量；该酶制剂应用操作简单、方便、快捷、具有广阔的开发潜力和应用前景。

主权项

一种海洋微生物发酵生产低温脂肪氧合酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将能产生脂肪氧合酶的菌种活化，再经过逐级低温驯化，驯化温度由高到低，30℃→25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低温环境中生长良好；该菌种的低温驯化培养基为：蛋白胨5.0～15.0g，亚油酸2.0～10.0g，NaCl 5.0～10.0g，L‑天冬氨酸0.5～2.0g，L‑谷氨酸0.5～2.0g，琼脂20.0g，自来水1.0L，pH值为6.0～8.0，于103kpa、121℃高压蒸汽灭菌30min；所述的能产生脂肪氧合酶的微生物来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号：1.228或1.239或1.2620；(2)按常规方法将步骤(1)中低温驯化后的脂肪氧合酶产生菌在液体种子培养基中于10～18℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；所述的液体种子培养基为:酵母膏10.0～20.0g，蛋白胨5.0～10.0g，NaCl5.0～10.0g，L‑天冬氨酸0.5～2.0g，L‑谷氨酸0.5～2.0g，自来水1.0L，pH值为6.0～8.0，于103kpa、121℃高压蒸汽灭菌30min(3)将液体二级种子按发酵液体积3～9％的接种量接入液体产酶培养基中，在10～18℃培养72～144h时，即海洋微生物发酵生产低温脂肪氧合酶结束；所述的液体产酶培养基为:牛肉膏3.0～10.0g，蛋白胨5.0～10.0g，NaCl5.0～10.0g，L‑天冬氨酸0.5～2.0g，L‑谷氨酸0.5～2.0g，Tween800.1～0.4g，(NH₄)₂SO₄ 1.0～1.5g，KH₂PO₄ 1.0～2.0g，MgSO₄ 0.1～0.5g，CaCl₂ 0.1～0.3g，ZnSO₄·7H₂O 2.4～3.0mg，自来水1.0L，pH值为6.0～7.0，于103kpa、121℃高压蒸汽灭菌30min；(4)将步骤(3)的发酵液在4,000～10,000rpm离心收集菌体，超声破碎，收集到的上清液即为粗酶液；(5)根据不同需要和使用对象不同，还可以将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。