[发明专利]混合底栖硅藻溶液中纯种硅藻的分离方法

摘要

本发明所公开的从混合底栖硅藻溶液中分离纯种硅藻的方法，能够一次性获取混合底栖硅藻中几乎所有可培养藻种的纯种，并可以有效获取其它分离方法中难以获取的非优势小规格底栖硅藻纯种；它基于不同规格和形态底栖硅藻及细菌离心时沉降速度不同的特性，先将不同规格形态藻类预分开；然后对预分的各组藻类经过多次离心洗涤，去掉绝大部分细菌和非目标规格的藻种；从而保证在固体平板培养基上涂平板培养单藻落时，细菌和不同藻种之间的污染大大降低，使获取无污染的纯种藻类变得有效和容易。并且本方法操作简单，方便适用，可直接应用于生产和研究。

主权项

一种混合底栖硅藻溶液中纯种硅藻的分离方法，其特征在于：按照以下步骤进行：首先将浓度为0.05‑0.15g/ml的混合底栖硅藻溶液中75μm以上的颗粒碎屑滤除，然后将混合底栖硅藻溶液分为三等份，分别放入离心管中，将第一支离心管中混合底栖硅藻溶液摇匀，在350‑450g RCF的条件下离心处理4‑5min，得到沉淀A和第一上清液；对第一上清液在850‑950g RCF的条件下离心处理4‑5min，得到沉淀B；将第二支离心管中的混合底栖硅藻溶液摇匀，在850‑950g RCF的条件下离心处理4‑5min得到第二上清液，并对第二上清液在1650‑1750g RCF的条件下离心处理4‑5min，得到沉淀C；将第三支离心管中的混合底栖硅藻溶液摇匀，在1650‑1750g RCF的条件下离心处理4‑5min得到第三上清液，并对第三上清液在2650‑2750g RCF的条件下离心处理4‑5min，得到沉淀D；取0.05‑0.2g沉淀A、全部的沉淀B、全部的沉淀C和全部的沉淀D，分别用20‑40ml的无菌海水稀释混匀，分别得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液；将沉淀A海水溶液在350‑450g RCF的条件下离心处理5‑6min，得到沉淀A₁，对得到的沉淀A₁进行第一离心处理7次，得到沉淀A₂，所述的第一离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在350‑450g RCF的条件下离心处理5‑6min，获取沉淀；将沉淀B海水溶液在850‑950g RCF的条件下离心处理5‑6min，得到沉淀B₁，对得到的沉淀B₁进行第二离心处理7次，得到沉淀B₂，所述的第二离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在850‑950g RCF的条件下离心处理5‑6min；将沉淀C海水溶液在1650‑1750g RCF的条件下离心处理5‑6min，得到沉淀C₁，对得到的沉淀C₁进行第三离心处理7次，得到沉淀C₂，所述的第三离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在1650‑1750g RCF的条件下离心处理5‑6min，获取沉淀；将沉淀D无菌海水溶液在2650‑2750g RCF的条件下离心处理5‑6min，得到沉淀D₁，对得到的沉淀D₁进行第四离心处理7次，得到沉淀D₂，所述的第四离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在2650‑2750g RCF的条件下离心处理5‑6min，获取沉淀；将得到的沉淀A₂、沉淀B₂、沉淀C₂和沉淀D₂以无菌操作法分别转移到适量无菌海水中，形成A₂、B₂、C₂和D₂的海水母液，再按照海水中细菌总数测定时倍比稀释的方法用无菌海水进行梯度稀释，获得沉淀A₂、B₂、C₂和D₂海水母液的10⁰、10^‑1、10^‑2、10^‑3、10^‑4各浓度梯度藻液；用平板分离法^[1] 培养A₂、B₂、C₂和D₂各浓度梯度藻液中底栖硅藻，显微镜下观察并收集平板上无细菌和其它单胞藻污染的藻落，即可获得各种底栖硅藻纯种。