[发明专利]一种钝叶瓦松组织培养再生体系的建立方法

摘要

本发明公开了一种钝叶瓦松组织培养再生体系的建立方法，涉及钝叶瓦松（Orostachys malacophyllus）采用植物组织培养方式以达到快速繁育种苗的方法，以解决其传统繁殖方式存在繁殖系数低的问题。本发明以钝叶瓦松带芽茎段为外植体，经过外植体处理、诱导培养、继代培养、分化培养、生根及移栽等过程建立了钝叶瓦松组织培养再生体系，以期为景天科植物大量繁殖提供新的快速有效途径,为优良种质资源保存、野生资源的保护以及实现对景天科植物的可持续开发利用提供理论依据。

主权项

一种钝叶瓦松组织培养再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体消毒：采集钝叶瓦松健康植株带芽茎段，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒3～8min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;（2）愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行愈伤组织诱导,接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～20小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成愈伤组织,培养2周后统计污染率、启动率和死亡率;（3）增殖培养：将步骤（2）诱导培养得到的愈伤组织切割成0.5cm3大小并接种于增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照13～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，30天后统计愈伤组织的增殖倍数,多次反复切割进行继代培养，以得到更多的愈伤组织;（4）分化培养：将步骤（2）或（3）诱导培养得到的愈伤组织切割成0.5cm3大小并接种于分化培养基上进行丛生芽诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽,接种后定期观察愈伤组织的分化情况，30天后统计不定芽的分化率;（5）壮苗培养：将步骤（4）得到的高度为0.1～0.5cm分化芽苗接种到壮苗培养中进行壮苗培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～15小时，光照强度为3000～4000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至大部分试管苗高于3cm,一个月后统计高于3cm的不定芽数;（6）生根培养：将步骤（5）过程获得的丛生芽切割成3.0～5.0cm带芽茎段并接种到生根培养基上进行诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照13～15小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；（7）炼苗移栽：将步骤（6）获得的高3.0～5.0cm的根系发达且叶片展开的健壮试管苗在培养室内半开瓶口放置1～3天，然后完全敞口炼苗5～10天，洗净在根系上附着的培养基,移栽到珍珠岩:园土:蛭石＝1:1:1的混合基质中，移栽前一天将基质浇透水,保持湿度90%以上，以塑料薄膜覆盖5～10天后揭去，30天后统计成活率。