[发明专利]一种蛋白质快速荧光标记的方法

摘要

本发明公开了一种对蛋白质进行快速荧光标记的方法，制备GFP帽子探针，利用它能与融合在蛋白质loop上的小肽GFP10‑11通过特异性非共价相互作用结合后产生绿色荧光的性质，实现对蛋白质快速、特异性的荧光标记和定量检测。本发明特异性高，且基本无背景荧光。GFP帽子探针本身基本不能被激发出荧光，只有GFP帽子探针与GFP10‑11特异性结合后才能产生荧光；使用方便；激发波长峰值为482nm左右，发生波长峰值为507nm左右，与绿色荧光蛋白基本一致，可采用常规的荧光显微镜、荧光光谱仪检测。实现荧光标记时间的控制，标记浓度的控制。本发明还能标记细胞表面蛋白，实现对细胞表面蛋白的定量以及示踪，能够用于筛选与细胞表面蛋白内化、多聚化等相关的药物。

主权项

1.一种对蛋白质进行快速荧光标记的方法，其特征在于，将一段能与GFP帽子探针特异性结合的小肽GFP10‑11融合于目的蛋白的loop区中，融合表达后加入体外制备的可溶的GFP帽子探针，GFP帽子探针即为GFP1‑9探针，通过GFP1‑9探针与小肽GFP10‑11非共价作用特异性结合；结合后产生荧光，从而引入荧光标记，小肽GFP10‑11的氨基酸序列如序列表中的序列2所示；所述GFP1‑9探针的制备方法：GFP1‑9探针是由氨基酸序列如序列表中的序列1所示的绿色荧光蛋白经过分子生物学酶酶切而制备得到，酶切后得到的GFP1‑9探针的氨基酸序列如序列表中的序列3所示。