[发明专利]用于检测艾滋病治疗药物DDI和TDF耐药突变位点的引物对和探针及其应用

摘要

本发明提供了用于检测艾滋病治疗药物DDI和TDF耐药突变位点的引物对和探针，包括检测HIV‑1病毒RNA的pol基因的第65位、70位和151位突变位点K65R、K70E和Q151M的ARMS引物对和Taqman探针。本发明还提供了上述引物对和探针的应用。本发明与传统测序方法相比，检测灵敏度高、特异性好、检测成本低，为临床艾滋病患者治疗提供了用药指导，实现了艾滋病患者个体化治疗，能够及时反应艾滋病患者用药有效性，改善艾滋病患者的生存质量，具有广泛的应用前景和长远的社会效益。

主权项

用于检测艾滋病治疗药物DDI和TDF耐药突变位点的试剂盒，其特征在于：RT‑PCR混合液                                   875uL；混合酶液                                       125 uL；阳性质控品                                     45 uL；阳性对照品混合液                               45 uL；阴性对照品混合液                               45 uL；其中，所述RT‑PCR 混合液包括：RT‑PCR 缓冲液，含20mM Tris‑Hcl、100mM NaCl，pH8.3 终浓度1×；dNTPs终浓度3mM；MgCl2 终浓度为1.6mM；3对上下游引物及3条探针；各ARMS引物对的上、下游引物的终浓度均为200nM；各ARMS引物对的Taqman以及试剂盒质控品引物对的Taqman探针终浓度均为300nM；所述3对上下游引物及3条探针包括检测HIV‑1病毒RNA的pol基因的第65位、70位和151位突变位点K65R、K70E和Q151M的ARMS引物对和Taqman探针；K65R的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，Taqman探针为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，分别用FAM和BHQ1标记5’端和3’端；K70E的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.4和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，Taqman探针为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，分别用HEX和BHQ1标记5’端和3’端；Q151M的ARMS引物对的上游引物和下游引物分别为SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，Taqman探针为SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，分别用ROX和BHQ1标记5’端和3’端；所述混合酶液包括：M‑MLV逆转录酶终浓度2U/μL；TaqDNA聚合酶终浓度0.05U/μL；所述阳性对照品混合液中模板cDNA终浓度 0.1～10ng/μL。