[发明专利]微藻中甘油三酯含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种微藻中甘油三酯含量的检测方法，进行微藻油脂提取时，采用了混合溶剂，将混合溶剂与微藻粉混合后进行超声波破壁提取；微藻破壁率高达99%，且破壁时间很短，整个过程提取微藻胞内甘油三酯的效率高。微藻中甘油三酯含量的检测方法采用气相法，气相法能更有效、准确的检测出甘油三酯含量。

主权项

一种微藻中甘油三酯含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）准备待测样溶液，包括以下步骤：①取微藻培养液离心分离后，去除上清液并将获取的微藻进行冷冻干燥，取冻干藻粉0.2g于试管中待提取；②将四氢呋喃∶氯仿∶正己烷按体积比为1∶0.8～1.5∶1～1.2配制混合溶液待用；③用移液管移取5mL步骤②配制的混合溶液，加入步骤①中盛有冻干后藻粉的试管中；④将步骤③获得的藻粉与混合溶液的混合物料在超声波场中进行第一破碎过程，第一破碎过程中混合物料在超声波场中破碎3～5次，每一次持续时间为30～60s，每次间隔时间10～30s；第一破碎过程完毕后离心分离，收集上清液后向离心分离得到的沉淀中加入新鲜的步骤②配制的5mL混合溶液，进行第二破碎过程，第二破碎过程的操作与第一破碎过程相同；第二破碎过程完毕后离心分离，收集上清液；重复第二破碎过程1次；⑤将步骤④各破碎过程结束后离心收集的上清液合并后倒入事先准备好的收集瓶中；⑥如果各次上清液合并后体积小于15mL，则用步骤②配制的混合溶液定容至15mL；（2）配制内标溶液，称取10mg二十八烷溶于1mL混合溶液中，所述混合溶液为准备待测样溶液时的步骤②配制的混合溶液；（3）配制标准溶液，称量50μL十七碳烷，50mg肉豆蔻酸，50mg棕榈酸，20mg豆甾醇和250μL植物油溶于4 mL混合溶液中，制成标准溶液；所述混合溶液为准备待测样溶液时的步骤②配制的混合溶液；（4）制作标准曲线，分别从步骤（3）配制的标准溶液中用移液管移取10μL，25μL，50μL，75μL，100μL标准溶液至GC管中，并用混合溶液定容至1mL，然后加入10μL步骤（2）配制的内标溶液获得五份标准曲线溶液；用气相色谱仪分别测定五份标准曲线溶液中的甘油三酯的峰面积值后，以甘油三酯峰面积为X值，以标准溶液中的甘油三酯含量为Y值，绘制标准曲线，计算回归方程；（5）测定微藻中甘油三酯含量，取步骤（1）准备的待测样溶液1mL于GC管中，加入10微升内标二十八烷溶液，然后进行GC检测；将GC检测得到的甘油三酯峰面积值作为X值代入回归方程中，其所计算得到的Y值即为微藻中甘油三酯含量。