[发明专利]一种高纯度胰蛋白酶的制备方法有效
| 申请号： | 201510102484.5 | 申请日： | 2015-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN104762284B | 公开（公告）日： | 2017-11-24 |
| 发明（设计）人： | 黄臻辉;汪雅雯;周伟洁 | 申请（专利权）人： | 上海上药第一生化药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所31283 | 代理人： | 朱水平,王卫彬 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高纯度胰蛋白酶的制备方法。该制备方法包括以下步骤(1)粗品溶解；(2)低pH孵放法灭活病毒；(3)疏水层析纯化；(4)酶原活化；(5)亲和层析纯化；(6)洗脱液除盐；(7)膜过滤去除病毒；(8)真空冷冻干燥，即得所述的高纯度胰蛋白酶。本发明的制备方法采用疏水层析纯化胰蛋白酶原，酶原激活后，亲和层析纯化胰蛋白酶，工艺较为简便，可以得到高纯度、高效价的胰蛋白酶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纯度 胰蛋白酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种高纯度胰蛋白酶的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：(1)粗品溶解：将胰蛋白酶粗品用pH为2.0～4.0的水溶液溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；(2)低pH孵放法灭活病毒：酸调节胰蛋白酶粗品溶解液至pH值为2.0～4.0，20～25℃放置1～3h；(3)疏水层析纯化：将疏水层析填料装柱，用pH为7.0～8.0的50mmol/L Na2HPO4‑NaH2PO4、1mol/L(NH4)2SO4缓冲液作为平衡液进行平衡，平衡后取步骤(2)中灭活病毒的胰蛋白酶粗品溶解液上样，上样完毕，用上述平衡液冲柱，直至流穿峰A280nm下至基线，然后用pH为7.0～8.0的50mmol/L Na2HPO4‑NaH2PO4溶液洗脱，收集洗脱峰；(4)酶原活化：在步骤(3)中收集的洗脱峰中，加入CaCl2溶液，使其终浓度为20～100mmol/L，调节pH值至7.3～7.6，加入胰蛋白酶，于0～10℃活化，得活化液；所述的胰蛋白酶与步骤(1)中的胰蛋白酶粗品的质量比为(0.5～1)：100；(5)亲和层析纯化：将亲和层析填料装柱，用pH为7.3～7.6的50mmol/L Tris‑HCl、150mmol/L NaCl缓冲液作为平衡液进行平衡，平衡后取活化液上样，上样完毕，用上述平衡液冲柱，直至流穿峰A280nm下至基线，然后用经盐酸调节500mmol/L NaCl至pH为2.0～3.0的溶液洗脱，收集洗脱峰；(6)洗脱液除盐：采用透析除盐或超滤除盐，再调节除盐完毕的洗脱液pH值至5.5～6.5，滤纸过滤，得滤液；(7)膜过滤去除病毒；(8)真空冷冻干燥，即得所述的高纯度胰蛋白酶。
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