[发明专利]转AtMYC2基因提高丹参毛状根中丹参酮和丹酚酸含量的方法

摘要

本发明涉及一种转AtMYC2基因提高丹参毛状根中丹参酮和丹酚酸含量的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过将拟南芥转录因子基因AtMYC2构建成植物高效表达载体，遗传转化丹参叶片获得AtMYC2基因过表达的转基因丹参毛状根，qRT‑PCR分析转基因丹参毛状根中AtMYC2以及丹参酮和丹酚酸生物合成途径中相关基因的表达，高效液相色谱法(HPLC)测定转基因丹参毛状根中丹参酮和丹酚酸的含量，DPPH清除自由基法测定丹参转基因毛状根中丹参酮和丹酚酸的抗氧化活性。本发明提供了一种可同时提高丹参毛状根中丹参酮和丹酚酸含量的方法，也为生产具有重要临床需求的丹参酮和丹酚酸提供了一种新型优质原料，对缓解丹参酮及丹酚酸药源的紧缺性问题具有积极的促进意义和应用价值。

主权项

一种转AtMYC2基因提高丹参毛状根中丹参酮和丹酚酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用基因克隆方法从拟南芥中克隆获得转录因子基因AtMYC2，所述AtMYC2基因序列为SEQ ID:1的DNA序列；(2)把AtMYC2基因可操作性地连于表达调控序列，形成含AtMYC2基因的植物表达载体；(3)将含AtMYC2基因的植物表达载体转化发根农杆菌，获得用于转化丹参的含AtMYC2基因植物表达载体的发根农杆菌菌株；(4)利用所构建的发根农杆菌菌株遗传转化丹参叶片，获得经PCR检测为阳性的转基因毛状根克隆；(5)定量RT‑PCR测定丹参转基因毛状根中AtMYC2基因及丹参酮和丹酚酸生物合成相关基因的相对表达量；(6)高效液相色谱法测定丹参转AtMYC2基因毛状根中丹参酮和丹酚酸含量，筛选丹参酮和丹酚酸含量显著提高的丹参转基因毛状根株系；(7)DPPH清除自由基法测定丹参转AtMYC2基因毛状根中丹参酮的抗氧化活性；所述的丹参酮为二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I或丹参酮IIA；所述的丹参酸为咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸A或丹酚酸B。