[发明专利]一种铁皮石斛组培快繁的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛组培快繁的方法，选择单核靠边期的花药作为外植体，对接种培养基、继代培养基、生根培养基进行优化，筛选出适合花药作为外植体进行铁皮石斛组培快繁的培养条件，继代培养后变异性小，可以长期保持其优良的性状，并且出愈率高。并且本发明对其消毒方法进行了改进，采用中药消毒加高温消毒相结合的方法，可以彻底杀除微生物，有效解决了污染的问题。

主权项

一种铁皮石斛组培快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体的选择与消毒：用70%浓度的酒精将手擦洗两遍，然后取单核靠边期的花药进行消毒处理，将花药用无菌纱布包裹浸入70％浓度的酒精中消毒10~20s，再浸入10%漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗1~3次；（2）接种培养：将经过处理的花粉接种到接种培养基上，培养获得愈伤组织或直接分化出丛生芽；所述的接种培养基为：MS＋6‑BA 0.1~0.4mg/L＋NAA 1~3mg/L+水解酪蛋白 0. 4～0. 8g/L，添加4%蔗糖和1%琼脂；培养基的PH为6.0，培养温度为25±1℃，12h/d的光周期，光照强度1600Lx；（3）继代分化培养：将未污染的愈伤组织或丛生芽转入第一继代培养基中使芽增殖，继代3次，转入第二继代分化培养基或不添加任何激素的空白培养基中继代一次，然后再转入第一继代分化培养基中继续增殖，根据需苗量重复上述步骤；所述的继代分化培养基为：MS+6‑BA0.5~1.0mg/L+ ZT0.1~0.5mg/L，添加5%蔗糖和1%琼脂，培养基的pH值为6，培养温度为24~28℃，光照强度1400~2000lx，光照时间为12~14小时/天；（4）生根培养：经25~35天，丛生芽长至2~3cm，转入生根培养基中培养1个月后，长成具根和4~6片叶的试管苗；所述的生根培养基为：MS+NAA0.1~0.4mg/L+IAA0.1~0.3mg/L，添加4%蔗糖和0.5%琼脂；所述培养基的pH值为6，温度为22~25°C，光照强度2600~2800lx，光照时间为12~14小时/天。