[发明专利]一种提高重组蛋白包涵体形成的方法

摘要

本发明公开了一种促进重组蛋白在基因表达时形成包涵体的方法。此方法特征在于，在不提高诱导物浓度的前提下，低强度短时间的超声处理加速诱导物渗透至细胞内，使重组蛋白高表达时更容易形成包涵体。不仅可以通过降低诱导物的使用量来降低对宿主细胞的毒害作用，还适用于在较低的诱导温度下才能表达重组蛋白的工程菌。此方法操作简便，成本低。

主权项

1.一种提高重组蛋白包涵体形成的方法，其特征在于，包括：工程菌发酵，重组蛋白的超声辅助诱导表达，细胞收集，包涵体纯化；工程菌表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在；工程菌在加入诱导物后立即进行超声辅助处理；采用扫频超声进行辅助处理；采用离心法进行包涵体纯化；按照下述步骤进行：（1）菌种活化：取超低温保藏的重组大肠杆菌，划线接种于固体培养基上，37℃培养12~16小时，固体培养基组成为：胰蛋白胨16 g/L，酵母提取物10 g/L，NaCl 5 g/L，琼脂15 g/L，卡那霉素50 μg/mL，pH 7.0;（2）种子液的制备：固体培养基挑取单菌落，接种至液体培养基，恒温摇床培养过夜，液体培养基组成为：胰蛋白胨16 g/L，酵母提取物10 g/L，NaCl 5 g/L，卡那霉素50 μg/mL，pH 7.0；（3）IPTG诱导表达：将种子液接种于同样的液体培养基的三角形锥形瓶中，其中接种量为1%（体积比），恒温摇床培养至OD600为0.8时，添加异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷（IPTG）至终浓度0.5 mM，将三角形锥形至于超声设备中进行一个低强度短时间的处理；低强度短时间的处理是指采用扫频超声进行辅助处理，其中扫频式的超声设备工艺参数如下：采用超声设备为扫频式的超声设备，温度为37℃，处理时间为1~4分钟；超声强度为0.06~0.12 W/cm3；诱导培养6~12小时，离心收集湿菌体，进行细胞破碎，然后利用离心法对重组蛋白包涵体的进行提取。