[发明专利]快速诱导繁殖盐生草幼根愈伤组织的方法

摘要

本发明涉及一种植物愈伤组织诱导及培养的方法，尤其是一种盐生草幼根愈伤组织快速诱导及增殖的方法。一种快速诱导繁殖盐生草幼根愈伤组织的方法，其主要特点在于步骤如下（1）获得无菌外植体；（2）愈伤组织诱导；（3）愈伤组织增殖培养。经过继代繁殖后，获得大量颜色嫩白，结构松脆的优良愈伤组织材料，并且解决了根系木质化的问题，可为盐生草幼根组织培养以及细胞悬浮培养提供技术支撑，愈伤的诱导与继代培养所用培养基均以2,4‑D （2,4‑二氯苯氧乙酸）为外源激素，实生苗培养、幼根愈伤诱导和愈伤增殖均在同一环境下进行，效果良好。实现了简单、易行、高效获得盐生草幼根愈伤组织的目标。

主权项

一种快速诱导繁殖盐生草幼根愈伤组织的方法，其特征在于步骤如下：（1）无菌外植体的获得：将盐生草种子置于超净工作台，首先用无菌水清洗种子，然后用75%的酒精处理0.5‑1min，紧接着用无菌水将种子表面的酒精清洗干净，再用20%的次氯酸钠处理1.5‑2min,最后用无菌水将种子表面的次氯酸钠清洗干净，获得盐生草无菌种子，将灭菌后的种子放置于培养无菌实生苗的培养基中培养10‑15 d，获得无菌实生苗的根系作为诱导愈伤的外植体；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）获得的无菌实生苗幼根组织横切为0.3‑0.5cm长的小段作为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养10‑15d，诱导愈伤发生；（3）愈伤组织增殖培养：将步骤（2）获得的颜色浅白，质地疏松的愈伤组织切割成直径为0.1‑0.3cm的小块，然后转接到诱导愈伤组织增殖培养基中，培养10‑15d后继续转接到新的诱导愈伤组织增殖培养基中进行继代增殖，最终获得颜色嫩白，结构致密的优良愈伤组织材料；步骤（1）中所述的培养无菌实生苗的培养基由1/2 Hoagland‑ Hoagland完全营养液， 6‑8g/L 的琼脂粉组成，PH=5.7‑5.8；步骤（2）中所述的诱导愈伤组织培养基由1/2 MS‑ MS营养液，1.0‑2.0mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸， 5‑7 g/L 琼脂，20‑30g/L蔗糖，0.05‑0.1g肌醇组成，PH=5.7‑5.8；步骤（3）中所述的诱导愈伤组织增殖培养基由1/2 MS‑ MS营养液，1.0‑2.0mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸， 5‑7 g/L 琼脂，20‑30g/L蔗糖，0.05‑0.1g肌醇组成，PH=5.7‑5.8。