[发明专利]一种磷脂的电致化学发光检测方法及其应用有效
| 申请号： | 201510113372.X | 申请日： | 2015-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN104730067B | 公开（公告）日： | 2017-08-22 |
| 发明（设计）人： | 田丹碧;左焕桢;江德臣;庄丽红;张卫;汤燕 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | G01N21/76 | 分类号： | G01N21/76 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种磷脂的电致化学发光检测方法，包括如下步骤(1)将待检测磷脂浸泡在低离子强度溶液中使磷脂活化，然后将活化后的磷脂用磷酸缓冲液冲洗并浸泡待用；(2)将经步骤(1)处理后的待检测磷脂浸入含有鲁米诺或L012的磷酸缓冲液中，以ITO为工作电极，Ag/AgCl、Pt分别为参比电极和对电极，利用电致化学发光法检测发光强度I0，然后向其中加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液，反应l～2min以后，再次检测发光强度I1，计算加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液前后发光强度的变化I1/I0。本发明的方法可用于测定细胞表面磷脂，同时还可以测定单个细胞表面磷脂，检测灵敏度高、专一性好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 磷脂 化学 发光 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种磷脂的电致化学发光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将待检测磷脂浸泡在低离子强度溶液中使磷脂活化，然后将活化后的磷脂用磷酸缓冲液冲洗并浸泡待用，其中，所述的低离子强度溶液为包含0.5mM磷酸缓冲液和310mM蔗糖的低离子强度溶液；(2)将经步骤(1)处理后的待检测磷脂浸入含有鲁米诺或L012的磷酸缓冲液中，以ITO为工作电极，Ag/AgCl、Pt分别为参比电极和对电极，利用电致化学发光法检测发光强度I0，然后向其中加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液，反应1～2min以后，再次检测发光强度I1，计算加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液前后发光强度的变化I1/I0，所述的电致化学发光法的检测过程为：在ITO表面黏上一个O型圈，向O型圈内加入待检的磷脂和鲁米诺的磷酸缓冲液，在ITO上加扫描速度为1V/S，‑1.0V～1.0V的电压，光电倍增管电压为500V，记录背景发光强度I0；待基线平稳后，暂停，从上端静态注射入口向O型圈内再加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液，等待反应1～2min后继续记录发光强度I1，计算加入磷脂酶D和胆碱氧化酶的混合溶液前后发光强度的变化I1/I0。
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