[发明专利]基于LSPR检测精子顶体酶活性的方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种基于LSPR检测精子顶体酶活性的方法、试剂盒及其应用。其中，该试剂盒包含功能化纳米金标记精子顶体酶底物，包含纳米金以及通过化学键合和/或物理吸附方式固定在纳米金表面的精子顶体酶底物；以及，适于使所述精子顶体酶底物与精子顶体酶专一结合并进行反应的缓冲液。藉由本发明的试剂盒及检测方法，能快速(约3分钟左右)、可靠、灵敏且低成本的检测精子顶体酶的活性。

主权项

一种基于LSPR检测精子顶体酶活性的试剂盒，其特征在于包含：功能化纳米金标记精子顶体酶底物，包含纳米金以及通过化学键合和/或物理吸附方式固定在纳米金表面的精子顶体酶底物，所述纳米金选自纳米金棒、纳米金球或纳米金立方块，其中纳米金棒的直径为20nm、长度为30nm～50nm，纳米金球的粒径为30～120nm，纳米金立方块的边长为10nm～100nm；适于使所述精子顶体酶底物与精子顶体酶专一结合并进行反应的缓冲液；以及，记载有所述试剂盒的使用方法的说明书，所述的使用方法包括：控制主要由所述缓冲液和均匀分散在所述缓冲液内的功能化纳米金标记精子顶体酶底物组成的混合溶液的浓度，使所述混合溶液在300‑1000nm波长范围内的吸收峰的峰值在0.6‑0.8之间；测定所述混合溶液在300‑1000nm波长范围内的吸收光谱，并记录吸收峰对应的吸收波长λ0以及吸收峰强度A0；在所述混合溶液中加入不同浓度Cn的精子顶体酶溶液，并分别测定在加入不同浓度的精子顶体酶标准溶液之后所获的不同混合反应体系在300‑1000nm波长范围内的吸收光谱，记录吸收峰对应波长λn和吸收峰值An，波长偏移值记为Δλn＝λn‑λ0，吸收峰偏移值记为ΔAn＝An‑A0，探知Cn与Δλn或ΔAn成正比，并由此建立精子顶体酶溶液浓度与波长偏移值或吸收峰偏移值的标准工作曲线，其中n为大于或等于2的自然数；以及，在所述混合溶液中加入未知浓度Cx的精子顶体酶溶液，并测定由此形成的混合反应体系在300‑1000nm波长范围内的吸收波长λx，波长偏移值Δλx＝λx‑λ0或吸收峰偏移值ΔAx＝Ax‑A0，并依据所述标准工作曲线而计算出Cx。