[发明专利]利用家蚕后部丝腺合成分泌蜂王浆主蛋白1的方法

摘要

本发明公开了一种利用家蚕后部丝腺合成分泌蜂王浆主蛋白1的方法。先构建家蚕合成分泌蜂王浆主蛋白1的载体pBMRJP1质粒，再利用显微注射将质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，利用piggyBac转座子的转座特性使红色荧光蛋白基因和蜂王浆主蛋白1基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，制成转基因家蚕，自交使蜂王浆蛋白1基因纯合，育成分泌蜂王浆主蛋白1的转基因家蚕。本发明借助荧光标志基因筛选转基因家蚕，利用该家蚕后部丝腺细胞特异地合成分泌蜂王浆主蛋白1，蜂王浆主蛋白1制品具有生物活性，开发了一种新型的蜂王浆主蛋白1生产工艺，简化提纯方法，降低生产成本，为大量生产蜂王浆主蛋白1奠定了基础。

主权项

 一种利用家蚕后部丝腺合成分泌蜂王浆主蛋白1的方法，其特征在于该方法的步骤如下：（1）采用分子生物学方法构建用于家蚕合成分泌蜂王浆主蛋白1的质粒pBMRJP1，质粒pBMRJP1包含有作为外源基因的蜂王浆主蛋白1基因和红色荧光DsRed标记基因表达框；（2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBMRJP1质粒及能够提供piggyBac转座酶的辅助质粒pHA3PIG质粒按浓度比1：1的比例导入家蚕产卵后6小时以内的受精卵内，利用piggyBac转座子将蜂王浆主蛋白1基因插入到家蚕基因组内；（3）蚕卵孵化后饲养至成虫，然后与非转基因家蚕交配制种续代成为G1代，在G1代蚕卵的转青期，通过荧光体视显微镜观察筛选出单眼表达红色荧光DsRed标记基因的转基因家蚕，饲养至成虫再与非转基因家蚕交配制种续代成为G2代；（4）G2代家蚕采用单蛾育，筛选出荧光体视显微镜下表达红色荧光DsRed标记基因的家蚕，采用同蛾区蚕蛾相互交配制成G3代；（5）G3代家蚕采用单蛾育，同蛾区表达红色荧光DsRed标记基因的蚕蛾相互交配，制成G4代；（6）从G4代开始选择红眼表型纯合的蛾区饲养，采用单蛾育和同蛾区蚕蛾交配的方式再连续3代进行选择和交配，育成红眼基因和蜂王浆主蛋白1基因纯合、后部丝腺细胞能够合成分泌蜂王浆主蛋白1的转基因家蚕；（7）通过该转基因家蚕后部丝腺细胞合成分泌蜂王浆主蛋白1，该蜂王浆主蛋白1随家蚕吐丝结茧行为进入蚕茧。