[发明专利]一种红根野蚕豆组织培养方法

摘要

本发明涉及一种红根野蚕豆组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明的技术主要分为两个部分，第一步以红根野蚕豆的种子为材料，在诱导培养基一号培养基中对红根野蚕豆进行发芽诱导；第二步将发芽长到五到六厘米的红根野蚕豆种苗以节为单位进行切段处理，并把切好的茎段接种于诱导芽和根的二号培养基中，从而培育出红根野蚕豆完整植株。本发明的红根野蚕豆组织培养方法解决了红根野蚕豆自然繁殖能力低的问题，从而满足了人类对红根野蚕豆的需求。

主权项

一种红根野蚕豆组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)外植体的处理和保存：将从野外采摘回来的红根野蚕豆种子作为外植体，外植体用84消毒液的100倍稀释液浸泡8～15分钟，再用自来水冲洗0.5～1小时，置于干净的玻璃器皿内备用，未用完的放于冰箱内保存以便日后使用；(2)外植体的灭菌：将处理过的外植体置于超净工作台上，用75％的酒精消毒25～35秒，再在体积浓度为0.1％的升汞中浸泡8～10分钟后，用无菌水冲洗2～4次；(3)外植体接种：将上述灭菌过的外植体破壳接种于培养瓶中，培养基采用诱导培养基一号，并进行封口标记；(4)组织培养：将接种好的培养瓶置于25～35℃的黑暗温室中培养5～8天，再置于25～35℃的光照温室中培养25～40天，得到红根野蚕豆种苗；(5)继代培养：将培养好的平均株高5～6cm的红根野蚕豆种苗在超净工作台上用接种工具以节为单位进行切割，将切割好的茎段接种于诱导芽和根的培养基二号中，并进行封口；将接种好的苗置于20～30℃的黑暗温室中培养5～8天后，再置于25～30℃的光照温室中培养30～50天，得到红根野蚕豆的完整植株；(6)炼苗和移栽：将培养好的红根野蚕豆完整植株置于温室大棚内进行5～8天的炼苗后，进行移栽；步骤(3)所述的诱导培养基一号由如下成分组成：(1)以一升计算：常量元素为：NH4NO3 750～850mg、KNO3 900～1000mg、CaCl2·2H2O 200～250mg、MgSO4·7H2O 150～200mg、KH2PO4 320～380mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H3BO3 6.0～6.5mg、MnSO4·4H2O 22.0～22.5mg、ZnSO4·7H2O 8.3～8.8mg、Na2MnO4·2H2O 0.22～0.28mg、CuSO4·5H2O 0.022～0.028mg、CoCl2·6H2O 0.022～0.028mg、FeSO4·7H2O 27.5～28mg、Na2‑EDTA·2H2O 37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg、盐酸硫胺素0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、蔗糖25～35g、马铃薯45～55g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8；或者为：(2)MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0‑6.0；或(3)1/2MS+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0‑6.0；或(4)N6+0～8％马铃薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％琼脂，PH值5.0‑6.0；步骤(5)所述的诱导芽和根的培养基二号由如下成分组成：(1)以一升计算：常量元素为：NH4NO3 750～850mg、KNO3 1800～2000mg、CaCl2·2H2O 420～460mg、MgSO4·7H2O 320～360mg、KH2PO4 650～750mg；微量元素：KI 0.80～0.85mg、H3BO3 6.0～6.5mg、MnSO4·4H2O 22.0～22.5mg、ZnSO4·7H2O 8.3～8.8mg、Na2MnO4·2H2O 0.22～0.28mg、CuSO4·5H2O 0.022～0.028mg、CoCl2·6H2O 0.022～0.028mg、FeSO4·7H2O 27.5～28mg、Na2‑EDTA·2H2O 37～37.5mg；有机成分：肌醇80～120mg、烟酸0.3～0.8mg、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg、盐酸硫胺素0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、矮壮素0.8～1.2g、香蕉60～80g、马铃薯45～55g、蔗糖25～35g、碳粉0.8～1.2g、琼脂3～8g、余量为蒸馏水；PH值5.8；或者为：(2)MS+0.1～0.8mg/l 6‑BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖、PH值5.0‑6.0；或(3)1/2MS+0.1～0.8mg/l 6‑BA+0.0～0.5mg/l NAA+6～8％香蕉+0.5～1g/l矮壮素+0.1～0.3％碳粉+0.4～0.6％琼脂+3～5％蔗糖，PH值5.0‑6.0。