[发明专利]一种扩张床吸附(EBA)介质和其制备方法

摘要

本发明提供一种用于扩张床(EBA)的离子交换介质，该介质母体基质主要由琼脂糖包裹碳化钨并交联琼脂糖，形成圆形通透具有空隙结构的复合物珠粒；介质基质活化并偶联配基后形成交换膜的复合介质。该介质基质活化先通过烯丙基化、氧化和溴化分步反应，再偶联3，3‑二胺基二丙基胺(DADPA)或2‑氯三乙胺(DEAE)配基，形成复合离子交换介质。本发明的离子交换介质是一种合适粒径合适密度合适吸附特性蛋白质和合适吸附容量的离子交换介质，该介质可用于柱层析纯化蛋白质和核酸，尤其是可应用于EBA技术纯化血液制品中的特殊蛋白质和核酸类物质。

主权项

一种用于扩张床的离子交换介质，其特征在于通过下述方法制备：1)取2g抽干的琼脂糖凝胶、0.5g NaCl制成重量比为4％的琼脂糖‑水悬浮液；将50g 4％琼脂糖‑水悬浮液转移至烧瓶中，室温下搅拌混合15分钟，分别按照碳化钨与琼脂糖凝胶的质量比为0.2、0.4、0.6、0.8、1和2的配比添加碳化钨，所述碳化钨的平均颗粒大小9‑11μm，然后以600rpm搅拌所得混合物15min，加热至93℃保持60min，作为水相备用；取200mL混合溶剂，所述混合溶剂含有体积比为10:1的石蜡和石油醚，往所述混合溶剂添加4％乳化剂得到混合液，所述乳化剂为10:4的Span80和Tween80；超声混合液5～10min，93℃水浴中预热作为油相备用；趁热将预热好的油相加入到水相中，3000rpm转速下搅拌30min，之后140‑180rpm低速搅拌，以每分钟2℃速率降至室温，再继续将温度降至10℃以下；过滤收集琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒，用石油醚、无水乙醇、去离子水冲洗产物；将过滤洗净后的琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒加入到等体积的二甲基亚砜的水溶液中，加入10mL环氧氯丙烷，20℃水浴条件下，150rpm搅拌30min；向反应体系中缓慢加入2g NaOH和0.2g NaBH4，将温度升到45℃，150rpm搅拌12h，反应完成后，搅拌降至室温，过滤收集交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒，用丙酮、去离子水冲洗产物，以标准筛过筛，分离得粒径为50‑250μm交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒；2)通过烯丙基化、氧化和溴化依次反应活化步骤1)制备的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒，获得活化的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒；3)在步骤2)活化的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒上偶联3，3‑二胺基二丙基胺或2‑氯乙基二乙胺，形成所述用于扩张床的离子交换介质；所述离子交换介质的湿密度为1.07～1.61g/ml，水重量比含量为88.3～51.2％，粒径范围为50～250μm，孔度为80.3‑77.1％，所述孔度指介质微球内部孔隙占微球体积的百分率。