[发明专利]一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法

摘要

本发明公开了一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，通过挑选饱满种子培养获取无菌苗，切片进行愈伤组织诱导，获得胚性愈伤组织，将胚性愈伤组织依次接种至EMS的液体分化培养基和NaCl的固体分化培养基中筛选获得耐盐试管苗，炼苗移栽使其成活，再移栽到温室大棚中，并结合滨海盐碱原土盆栽耐盐碱鉴定方法获得耐盐蒲公英植株。本发明方法操作简单，效果好，效率高，加速了蒲公英耐盐育种的进程，应用前景非常广泛。

主权项

一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)无菌苗培养挑选饱满种子用75％的乙醇处理30～50s，再用无菌水冲洗3～4次，用0.1％升汞浸泡10～15min，然后用无菌水冲洗3～4次，接种到含有7g/L琼脂粉、10g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基中，在室温为21～23℃的条件下，暗培养30d后获得无菌苗；2)愈伤组织诱导取无菌苗的叶片，切成0.5×0.5cm大小的方块，接种到诱导培养基中，35～40d获得胚性愈伤组织；所述的诱导培养基为含0.5mg/L 6‑苄氨基嘌呤、0.2mg/L二氯苯氧乙酸、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；3)EMS诱变处理和NaCl胁迫筛选将胚性愈伤组织接种在含有0.4％(V/V)浓度EMS的液体分化培养基中，进行震荡培养2h，用无菌水冲洗干净，转至含有300mmol/L NaCl 的固体分化培养基中，培养28d后，转至不含NaCl的相同培养基中21d，在含有NaCl和不含NaCl的固体分化培养基中交替进行，重复2次，选择高3～4cm的小苗，转移到含有300mmol/LNaCl的MS培养基中，再次进行耐盐筛选，21d后将生长正常的小苗接种到生根培养基中，7～10天完成生根，获得耐盐试管苗；所述的液体分化培养基为含1mg/L激动素、0.3mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；所述的固体分化培养基为含1mg/L激动素、0.3mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；所述的生根培养基为含有0.5mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉、30g/L 蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；4)耐盐植株获得将耐盐试管苗先进行闭瓶炼苗7‑15d，而后开瓶炼苗5‑10d，移栽至蛭石和河沙按1:1（V/V）比例混合而成的基质中，使其成活，20‑30d后，再移栽到温室大棚的土壤中；5)耐盐植株的鉴定利用土壤全盐含量0.6％左右的盐碱原土盆栽法对获得的耐盐植株进行耐盐性鉴定，以未经诱变和NaCl筛选的再生植株作对照，筛选出成活好，长势优，各项生长指标明显优于对照的耐盐植株。