[发明专利]一种抗血小板聚集的短葶山麦冬皂苷组合物

摘要

本发明涉及的短葶山麦冬皂苷组合物的制备方法包括如下：取短葶山麦冬，加水浸泡6‑18h，打碎，再加水煎煮0.5‑6h，两次，提取液过滤，静置放凉后，离心，弃去不溶物，上清液、过D‑101树脂柱吸附，重复上样一次，静置6‑18h，先以水洗脱至洗脱液molish反应呈阴性，再以30％的乙醇溶液洗脱，最后用85％的乙醇溶液洗脱，洗脱液分别回收溶剂，将30％乙醇部位和85％乙醇部位混合，冻干，得短葶山麦冬皂苷组合物。本发明涉及的短葶山麦冬皂苷组合物具备抗血栓、抗凝血、缩短凝血时间、抗血小板聚集、抗肺血栓、保护缺氧复氧损伤细胞的活性。

主权项

1.一种抗血小板聚集的短葶山麦冬皂苷组合物的分析鉴定方法，其特征在于：短葶山麦冬皂苷组合物的制备方法如下：取短葶山麦冬，加水浸泡6-18h，打碎，再加水煎煮0.5-6h，两次，提取液过滤，静置放凉后，离心，弃去不溶物，上清液、过D-101树脂柱吸附，重复上样一次，静置6-18h，先以水洗脱至洗脱液molish反应呈阴性，再以30％的乙醇溶液洗脱，最后用85％的乙醇溶液洗脱，洗脱液分别回收溶剂，将30％乙醇部位和85％乙醇部位混合，冻干，得短葶山麦冬皂苷组合物；短葶山麦冬皂苷组合物的薄层色谱定性鉴别取短葶山麦冬皂苷组合物，1ml甲醇溶解，LC-C18SPE固相萃取小柱吸附，分别用水、40％、75％、85％甲醇溶液各8ml洗脱，收集75％洗脱部位，挥干溶剂，用少量甲醇溶解，备用；展开系统如下：丙酮-乙酸乙酯-水-乙酸，5∶5∶1∶0.2；短葶山麦冬皂苷组合物的HPLC-ELSD色谱，用HPLC-ELSD进行成分定性测定；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×250mm，5μm；色谱条件：甲醇-水梯度洗脱，洗脱条件；总皂苷HPLC-ELSD色谱条件短葶山麦冬多糖含量测定方法，标准品与供试品的制备标准品的制备：精密称取80℃烘至恒重的果糖8.30mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解，并定容，得0.083mg/ml标准溶液，摇匀，备用；供试品的制备：精密称取短葶山麦冬皂苷组合物样品适量，放至10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，摇匀，备用；最大吸收波长的选择精密量取标准品溶液7ml，用甲醇稀释并定容至10ml；取供试品溶液2.5ml至10ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容；分别精密量取甲醇，标准品稀释后溶液，供试品稀释后溶液2ml至具塞试管中，各加入5％苯酚溶液1ml，再迅速沿管壁加入5ml浓硫酸，40℃水浴反应15min，冰水浴3min终止反应，放至室温，在波长400～760nm处扫描，选择最大吸收波长为490nm；标准曲线的制备精密量取果糖标准品溶液1、2、3、5、7ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释并定容，制成0.0083mg/ml、0.0166mg/ml、0.0249mg/ml、0.0415mg/ml、0.0581mg/ml的一系列浓度的标准品溶液，分别从各标准品溶液中精密量取2ml至具塞试管中，按照上述“最大吸收波长的选择”项下的方法显色，以随行空白溶液为参比溶液，在波长490nm下测定吸光度，以浓度mg/ml为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线为：Y＝13.38x-0.002，r＝0.9998，n＝3，果糖在8.3μg/ml～58.1μg/ml范围内线性良好；样品测定精密量取短葶山麦冬皂苷组合物供试品溶液2.5ml至10ml容量瓶中，甲醇稀释并定容；精密量取2ml稀释后供试品溶液至10ml具塞试管中，显色，以随行空白溶液为参比溶液，在波长490nm下测定吸光度，按照标准曲线计算各个样品的多糖含量。