[发明专利]免疫兔血清中猪圆环病毒PCV2抗体水平间接Elisa检测试剂盒及其检测方法和应用

摘要

本发明提供免疫兔血清中猪圆环病毒PCV2抗体水平间接Elisa检测试剂盒，所述试剂盒以PCV2病毒基因组开放阅读框ORF2编码的重组蛋白为包被抗原。本发明还提供其检测方法和应用。本发明的检测免疫兔血清PCV2抗体水平的间接ELISA方法可以用于充分评价免疫兔血清中针对PCV2的抗体水平。

主权项

免疫兔血清中猪圆环病毒PCV2抗体水平间接Elisa检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒以PCV2病毒基因组开放阅读框ORF2编码的重组蛋白为包被抗原，以pET30a‑E.Coli的菌体裂解液为对照包被物，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.2，所述试剂盒中包被抗原的包被浓度为：100ng/100μL；所述试剂盒还包括一抗抗体稀释液，所述一抗抗体稀释液为：含有2% pET30a‑E.Coli菌体裂解液,5%脱脂奶粉和5%BSA的PBST；所述百分比为质量体积比；所述试剂盒还包括酶标二抗，所述酶标二抗为山羊抗兔二抗，所述酶为辣根过氧化物酶，所述酶标二抗的稀释度为1:2000；所述重组蛋白的制备方法为：将PCV2的Cap编码基因克隆至pET30a(+)表达载体的多克隆位点处，获得重组表达质粒，将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)pLys宿主感受态细胞中，经筛选鉴定获得重组表达菌株，在IPTG诱导下，表达PCV2‑rCap，经过镍柱亲和层析，获得了纯化的PCV2‑rCap。