[发明专利]一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示量的方法有效
| 申请号： | 201510143945.3 | 申请日： | 2015-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN104725517B | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 赵景壮;徐黎明;刘淼;卢彤岩 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N15/70;A61K39/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 150070 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示量的方法。该方法包括1)将由a凝集素的Aga2亚基的编码基因与目的蛋白的编码基因融合而成的融合基因导入能表达a凝集素的Aga1亚基的受体酵母细胞，得到重组酵母细胞；所述目的蛋白以融合蛋白的形式被展示于所述重组酵母细胞表面；2)将外源表达的由a凝集素的Aga2亚基和所述目的蛋白融合而成的融合蛋白人工锚定到已经天然展示了所述目的蛋白的所述重组酵母细胞表面。实验证明，此种方法能够明显增加酵母细胞表面的目的蛋白展示量。这一结果解决了其在口服免疫过程中抗原提呈量不足的问题，为新型口服疫苗的研制提供重要的理论基础与方法指导。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 酵母 细胞 表面 目的 蛋白 展示 方法 | ||
【主权项】：
一种在酵母细胞表面展示目的蛋白的方法，包括：(1)将a凝集素的Aga2亚基的编码基因与目的蛋白的编码基因融合，得到融合基因，记为融合基因1；在所述融合基因1中，所述a凝集素的Aga2亚基的编码基因位于5’端，所述目的蛋白的编码基因位于3’端；(2)将所述融合基因1导入受体酵母细胞，所述受体酵母细胞能表达a凝集素的Aga1亚基，得到表达融合蛋白1的重组酵母细胞，所述融合蛋白1为由所述融合基因1编码得到的蛋白质；所述融合蛋白1展示于所述重组酵母细胞表面；(3)制备外源表达的融合蛋白2；所述融合蛋白2由a凝集素的Aga2亚基和步骤(1)中所述的目的蛋白融合而成；在所述融合蛋白2中，所述a凝集素的Aga2亚基位于N端，所述目的蛋白位于C端；(4)将所述融合蛋白2与所述重组酵母细胞反应，使所述融合蛋白2中的所述a凝集素的Aga2亚基通过二硫键与所述a凝集素的Aga1亚基连接，所述a凝集素的Aga1亚基锚定于所述重组酵母细胞的细胞壁，从而实现在所述重组酵母细胞表面既展示所述融合蛋白1，又展示所述融合蛋白2。
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