[发明专利]一种适用于淡水红藻DNA的提取方法

摘要

本发明属于藻类DNA的提取方法技术领域，具体涉及一种适用于淡水红藻DNA的提取方法。本发明主要解决了现有用于提取淡水红藻DNA的提取试剂盒存在无法提取高质量DNA的技术问题。本发明的主要步骤是：一、向经液氮研磨的藻体中加入多糖溶解缓冲液，溶解藻体表面多糖，二、加入DNA提取缓冲液，裂解细胞；三、抽提以及DNA纯化。本发明能分离纯化出高质量的串珠藻属和熊野属植物的基因组DNA，DNA产量大，纯度高，能够满足后续的分子生物学研究的要求。

主权项

一种适用于淡水红藻DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取淡水红藻藻体100‑150mg置于研钵中，向研钵中加入适量液氮，将淡水红藻藻体研磨成粉末；2)将研磨好的淡水红藻藻体粉末置于第一个2.0ml的离心管中，并向离心管中加入1ml的多糖溶解缓冲液，充分混匀后将离心管置于55℃的水浴或金属浴中加热1h，在浴热过程中间隔颠倒混匀；3)将浴热混匀后的淡水红藻藻体冷却至常温，在5000rpm的转速下离心处理3min，弃上清，收集沉淀物；4)向步骤3)收集的沉淀物中依次加入800μl 55℃预热的DNA提取缓冲液、2μlβ‑巯基乙醇和6‑8μl浓度为20mg/L的蛋白酶K，充分混匀后置于55℃的水浴或金属浴中加热1h，浴热过程中每10min颠倒混匀一次；5)向步骤4)制备的混合液中加入800μl的水饱和酚，温和混匀5min，在13000rpm的转速下离心处理3min，取上清液置于第二个2.0ml的离心管中；6)向步骤5)制备的上清液中加入与上清液相同体积的酚、氯仿和异戊醇的混合物，其中酚、氯仿与异戊醇的体积比为25:24:1，轻摇萃取5min，室温下在13000rpm的转速下离心处理3min，取上清液置于第三个2.0ml的离心管中；7)向步骤6)制备的上清液中加入与上清液相同体积的酚、氯仿和异戊醇的混合物，其中酚、氯仿与异戊醇的体积比为25:24:1，轻摇萃取5min，室温下在13000rpm的转速下离心处理3min，取上清液置于第四个2.0ml的离心管中；8)向步骤7)制备的上清液中加入与上清液相同体积的氯仿和异戊醇的混合物，其中氯仿与异戊醇的体积比为24:1，轻摇萃取5min，室温下在13000rpm的转速下离心处理3min，取上清液置于第五个2.0ml的离心管中；9)向步骤8)制备的上清液中加入‑20℃预冷的无水乙醇和pH为5.2浓度为3mol/L的醋酸钠，其中无水乙醇与上清液的体积比为2:1，醋酸钠与上清液的体积比为1:10，轻摇混匀并在‑20℃的温度下冷冻30min或在常温下静置直至絮状物出现，并于室温下在10000rpm的转速下离心处理20min，弃上清，收集沉淀物；10)向步骤9)收集的沉淀物中加入1ml浓度为75％温度为40℃预热的乙醇，轻摇洗涤沉淀，并于室温下在10000rpm的转速下离心处理5min，弃上清，收集沉淀物；11)在室温下将步骤10)收集的沉淀物置于通风处挥发乙醇，待沉淀物透明后，向透明溶液中加入50μl的超纯水或TE溶液，并在4℃的温度下静置1h后即得淡水红藻DNA。