[发明专利]培养铁皮石斛原球茎的方法

摘要

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种药用植物的培育技术，具体涉及一种培养铁皮石斛原球茎的方法；该方法依次包括前期准备、原球茎的萌发与增殖、过渡观察培养、生物反应器生产步骤。利用间歇浸没生物反应器进行铁皮石斛原球茎生产的方法是在无菌条件下进行的，灭菌处理的方法为高温高压湿热灭菌，通过上述技术方案，利用间歇浸没生物反应器培育铁皮石斛原球茎，可以在短时间内获得高的增殖率，缩短了铁皮石斛原球茎的培养周期且所培养的铁皮石斛原球茎质量高；该方法操作简单，自动化，从而实现省时省力；同时可以减少培养器皿的使用，节约人力成本和培养成本，实现了低成本的培养方法，适合于产业化推广。

主权项

一种培养铁皮石斛原球茎的方法，包括如下步骤 ：（1）前期准备：①固体培养基配制：固体培养基的配方为 1/2MS 基本培养基，添加 NAA 0.1~5.0 mg/L；蔗糖浓度 20~50 g/L；香蕉液 30~80 g/L；琼脂粉 4~10 g/L，调整 pH 值 5.0~7.0，煮沸，分装，灭菌处理后，备用；②液体增殖培养基配制：液体增殖培养基的配方为 1/2MS 基本培养基，添加 NAA0.1~5.0 mg/L；6‑BA 0.1~10.0 mg/L；蔗糖浓度30~50 g/L；香蕉液 40~80 g/L，调整 pH 值5.0~7.0，培养液配制完成后，煮沸，分装，灭菌处理后，备用；③生物反应器灭菌：将生物反应器进行组装，在组装过程中将玻璃珠放入生物反应器中，然后包扎灭菌；灭菌处理后，备用；（2）原球茎的萌发与增殖培养：将外植体接种于 1/2 MS 固体培养基中，进行原球茎的萌发与增殖，然后经过 3~5 次继代培养，筛选出生长快、增殖率高、无明显分化的铁皮石斛原球茎，作为生物反应器生产铁皮石斛原球茎的种子；（3）过渡观察培养：将步骤（2）中筛选出的优质原球茎先接种到液体增殖培养基中进行观察培养，接种密度 10~70 g/L，培养时间 3~5d；（4）生物反应器培养：将步骤（3）中的原球茎接种到间歇浸没生物反应器中，接种密度 10~70 g/L；浸没频率5~30 min/4~12 h，培养时间 20~60 d；培养条件：光照强度 1000~3000 lux，光照 12 h/d，温度 10~30℃；所述步骤（4）生物反应器培养中，所述生物反应器的生长盘内平铺一层玻璃珠，所述玻璃珠的直径为 1~10mm。