[发明专利]烟草原生质体的高效分离、转化和再生体系

摘要

本发明涉及一种用于烟草原生质体的高效分离、转化和再生体系，所述再生体系包括专用于烟草原生质体的分离、转化和再生的试剂组合和方法，其中试剂组合包括1/2MS培养基、MS培养基、酶解液、C培养基、W5洗液、Evans Blue染液、转化液、聚乙二醇溶液、C:B培养基、A培养基、MS再生培养基，转化方法包括无菌苗的培养，原生质体的分离和纯化，原生质体的转化和原生质体的培养及再生等步骤，本发明所述的方法具有步骤简单、操作规范、污染率低、转化效率高等优点。

主权项

一种用于烟草原生质体的高效分离、转化和再生过程中的试剂组合，其特征在于，包括1/2MS培养基、A培养基、B培养基、C培养基、MS培养基、MS再生培养基、W5洗液、转化液、含有聚乙二醇的溶液、酶解液、W5洗液和C:B培养基；所述1/2MS培养基、A培养基、B培养基、C培养基、MS培养基和MS再生培养基的物质组成包括如下试剂：其中所述MS微量100×的物质组成如下：成份终浓度mg/LCoCl₂·6H₂O2.5KI83MnSO₄·H₂O1690H₃BO₃620CuSO₄·5H₂O2.5Na₂MoO₄·2H₂O25ZnSO₄·7H₂O860所述铁盐1000×的物质组成如下：成份终浓度mg/LFeNaEDTA36700所述W5洗液的组成包括氯化钠8.9g/L、氯化钙18.4g/L、氯化钾0.37g/L，葡萄糖0.9g/L；所述转化液的组成包括甘露醇91g/L，氯化镁14.25g/L，乙磺酸1g/L；所述含有聚乙二醇溶液的组成包括聚乙二醇400g/L，甘露醇72.9g/L，硝酸钙16.4g/L。