[发明专利]一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗株有效
| 申请号： | 201510161432.5 | 申请日： | 2015-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN104962581B | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 杨吉飞;朱启运;陈新新;刘志杰;关贵全;罗建勋;殷宏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/45;C12N15/34;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730050 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明提供一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组新城疫病毒疫苗株的制备方法及重组新城疫病毒疫苗株。本发明的方法包括：构建其中插入非洲猪瘟病毒（ASFV）的p72基因的重组转录质粒，构建转录辅助质粒系统，将上述转录质粒和转录辅助质粒共转染所述新城疫致弱株可以复制的宿主细胞BHK‑21，拯救获得重组病毒株。利用本发明制备的表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的疫苗株，在防控该动物疫病方面具有重要的储备和战略意义，并可在治疗与预防非洲猪瘟病毒中应用。 | ||
| 搜索关键词： | 非洲猪瘟病毒 疫苗株 重组新城疫病毒 转录辅助质粒 蛋白 转录质粒 构建 制备 重组病毒疫苗 重组病毒株 动物疫病 宿主细胞 战略意义 共转染 新城疫 复制 储备 基因 预防 治疗 应用 | ||
【主权项】：
1.表达非洲猪瘟病毒p72蛋白并可对非洲猪瘟病毒产生免疫作用的疫苗株的制备方法，其特征在于所述方法包括：（1）构建重组转录质粒，所述重组转录质粒是将非洲猪瘟病毒（ASFV）的p72基因插入新城疫弱毒疫苗株MG7的基因组cDNA序列，然后连接至转录载体质粒pBSK中，组装获得重组转录质粒pBSK-MG7-ASFVp72；其所述新城疫弱毒疫苗株MG7是通过反向遗传学改造，将其F蛋白裂解位点替换为Lasota株F蛋白的裂解位点，由此突变致弱的的人工致弱毒株；（2）构建转录辅助质粒系统，所述转录辅助质粒系统包括编码所述新城疫病毒致弱株MG7的核蛋白（NP）的cDNA序列的转录辅助质粒pBSK-NP和所述新城疫病毒致弱株MG7的磷蛋白（P）的cDNA序列的转录辅助质粒pBSK-P以及所述新城疫病毒致弱株MG7的大聚合酶蛋白（L）的cDNA序列的转录辅助质粒pBSK-L；（3）将步骤（1）所述的重组转录质粒和步骤（2）所述的转录辅助质粒系统共转染所述新城疫弱毒疫苗株MG7可以复制的宿主细胞BHK-21，培养转染后的宿主细胞；（4）收获上清液，过滤后接种鸡胚尿囊腔拯救重组病毒株;所述新城疫弱毒疫苗株MG7的基因组cDNA序列如SEQ ID NO.5所示，所述非洲猪瘟病毒（ASFV）的p72基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
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