[发明专利]一种在苗期鉴定抗冻结球白菜的方法

摘要

本发明公开了一种在苗期鉴定抗冻结球白菜的方法，它包括对幼苗进行冷驯化处理；取叶圆片用液氮快速冷冻并用甲醇提取；以核糖醇作为内标；使用硅烷化试剂N‑甲基‑N‑三甲基硅基三氟乙酰胺（MSTFA）进行衍生化处理；GC‑MS分析和数据处理等步骤。本发明的方法既可用于稳定遗传群体抗冻性鉴定，也可用于变异单株抗冻性鉴定，该方法样品用量少，对植株伤害小，不影响后期生长和抽薹开花，有利于抗冻材料留种或进行杂交育种。同时，本发明在苗期开展鉴定工作，对土地、人工等要求更低，用时较短，且不受季节影响，适合较大批量抗冻种质资源的筛选。

主权项

一种在苗期鉴定抗冻结球白菜的方法，其特征在于它包括如下步骤：（1）将结球白菜种子播种到育苗盘中育苗；待幼苗长至5~6片真叶时在人工气候箱内对幼苗进行冷驯化处理；（2）在经冷驯化处理的结球白菜幼苗上取叶圆片，称取3份叶圆片样品，分别置于圆底管中用液氮快速冷冻；用研磨棒在冰冻条件下将样品磨碎，加入预冷却的甲醇摇匀；加入核糖醇作为内标摇匀；使用热混合器提取并进行离心处理；转移上清液到另一玻璃管中，加入预冷却的氯仿摇匀；加入预冷却的双蒸水摇匀；进行离心处理后转移上清液到另一干净的玻璃管中，将样品室温真空干燥；（3）衍生化处理：向真空干燥过的样品中加入甲氧氨基化试剂反应并持续振荡；然后将硅烷化试剂N‑甲基‑N‑三甲基硅基三氟乙酰胺加入样品反应管中振荡反应；（4）GC‑MS分析：转移衍生化好的样品到适合GC‑MS分析的内衬管中进行GC‑MS分析；（5）数据处理：将GC‑MS分析获得的数据生成谱图并积分，采用内标法对样品中苹果酸、果糖和甘露糖进行定量，将3份样品取平均值，计算结球白菜苹果酸、果糖和甘露糖含量；选取苹果酸、果糖和甘露糖含量达标的结球白菜幼苗作为抗冻材料移栽到大田用于杂交育种或留种。