[发明专利]从猪小肠黏膜肝素提取后废弃液中制备脱氧核糖核酸的方法

摘要

本发明涉及从动物组织制备脱氧核糖核酸领域，尤其是一种利用猪小肠黏膜肝素提取后的废弃液中制备脱氧核糖核酸的方法。将猪小肠黏膜肝素提取后废弃液进行柱吸附、脱附、酸沉、复溶、醇沉、透析，获得高纯度的脱氧核糖核酸，其分子量在3～70kDa之间。本发明选用猪小肠黏膜肝素提取废弃液作为脱氧核糖核酸的提取原料，不仅能提高猪小肠粘膜的综合利用率，降低废液排放，实现猪小肠黏膜中肝素与核酸产品的联产，提高原料附加值，而且能为脱氧核糖核酸提供稳定的工业化原料，利用本发明技术获得的产品在提高免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗心脑血管疾病等中具有广阔的市场应用价值。

主权项

一种从猪小肠黏膜肝素提取后废弃液中制备脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）柱吸附：将离子交换树脂装入吸附柱中，用泵将猪小肠黏膜肝素提取后废弃液通过含有树脂的吸附柱内进行吸附；吸附所用的树脂为罗门哈斯AMBERLITE FPA 98 CL树脂，猪小肠黏膜肝素提取后废弃液与树脂的重量比为700～1200:1；（2）脱附：用浓度为0.05～0.2 mol/L的氯化钠洗脱吸附柱，用温度为60～70 ℃浓度为2.0～4.0mol/L的氯化钠溶液洗脱，收集脱附液；步骤（2）中，清洗吸附柱所用0.05～0.2 mol/L的氯化钠溶液体积为吸附柱体积的2～3倍，脱附所用的2.0～4.0 mol/L氯化钠溶液体积为吸附柱体积的1.5～3倍；（3）酸沉：将收集的脱附液调节pH至1～3，静置；（4）复溶：将（3）中混合液进行离心，收集沉淀，用蒸馏水清洗沉淀2～4次，加入蒸馏水，搅拌下加入碱溶液，使沉淀溶解；（5）醇沉：加入体积分数为90%～95%的乙醇进行沉淀，静置12～24 h，去掉上清液，收集下层沉淀；步骤（5）中，醇沉所用乙醇的体积为复溶后溶液体积的3～4倍；（6）透析：将（5）中沉淀溶于37～55℃蒸馏水中，转入透析袋中，透析，去除小分子物质，透析结束后，将透析内液旋转蒸发浓缩，冻干，获得寡聚脱氧核糖核酸；该方法所获得的脱氧核糖核酸的分子量分布范围为3～70KDa之间，脱氧核糖核酸的纯度达到97%以上，磷酸根含量在9.0 wt%～9.3wt%。