[发明专利]一种胎盘造血干细胞的制备方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种胎盘造血干细胞的制备方法。该方法用灌洗液灌注清洗预处理后的胎盘；将动员剂从胎盘动脉灌注至胎盘静脉流出动员剂停止并结扎胎盘动静脉静置；松开胎盘动静脉并从动脉灌注与前述同量的动员剂，从静脉处收集全部液体，离心取细胞沉淀，然后依次经羟乙基淀粉法和红细胞裂解法回收纯化包含造血干细胞的单个核细胞，重悬后获得所述胎盘造血干细胞。本发明改善动员剂灌注法工艺，选择多种相互适宜的组分组成新型动员剂应用于胎盘造血干细胞制备过程中，不仅能够动员胎盘内部的造血干细胞并在短时间内迅速进入血液循环系统，而且同时提高了包含造血干细胞的单个核细胞数量及其活细胞数量以及CD34阳性细胞数量。

主权项

1.一种胎盘造血干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、胎盘预处理后，用灌洗液灌注清洗胎盘；步骤2、将动员剂从胎盘动脉灌注至胎盘静脉流出动员剂停止并结扎胎盘动静脉静置，所述动员剂为包括0.3‑3mg/L AMD3100、1倍的枸橼酸盐缓冲溶液、1倍的青‑链霉素双抗、0.01‑0.1mg/mL的罂粟碱、 0.5‑2mmol/L的N‑乙酰半胱氨酸、0.3mg/mL维生素C和50ng/mL的Z‑VAD‑FMK的DMEM高糖基础培养基；其中，5倍枸橼酸盐缓冲液配制方法，如下：称取枸橼酸钠粉末26.3g、枸橼酸粉末3.27g、葡萄糖12.7g、磷酸二氢钠 4.44g、腺嘌呤0.55g，把上述各组分溶于400mL的去离子水中，充分搅拌混匀后形成5倍枸橼酸盐缓冲溶液，0.22μm过滤，分装；稀释配置成1倍的枸橼酸盐缓冲溶液使用；步骤3、松开胎盘动静脉并从动脉灌注与步骤2同量的动员剂，从静脉处收集全部液体，离心取细胞沉淀，然后依次经羟乙基淀粉法和红细胞裂解法回收纯化包含造血干细胞的单个核细胞，重悬后获得所述胎盘造血干细胞。