[发明专利]一种山豆根毛状根的诱导方法

摘要

一种山豆根毛状根的诱导方法，包括如下步骤：(1)取山豆根种子进行消毒后接种到MS种子培养基中萌发；(2)萌发的种子根据子叶、下胚轴、叶片、茎段切成1‑2cm的小块，用解剖刀划伤，接种到MS外植体培养基中进行预培养；(3)将预培养的材料浸泡到发根农杆菌菌液中进行细菌侵染；(4)将细菌侵染后的材料接种到MS共培养培养基中进行共培养；(5)将共培养材料接种到抑菌培养基中进行抑菌培养脱菌。采用本发明进行毛状根诱导所获得的毛状根生长速度快、遗传稳定性好、合成能力强且稳定、向培养基中释放部分代谢产物的特点，操作简便、快捷、诱导率高，可用于大规模生产工业用山豆根的替代资源。

主权项

一种山豆根毛状根的诱导方法，其特征在于,该方法包括以下步骤：(1)种子萌发：取山豆根种子，使用0.1％升汞消毒10min，用无菌水冲洗3次，并用消毒滤纸除去表面水分后接种到MS种子培养基中，放置在培养室内进行萌发培养15天诱导种子萌发获得小苗，所述MS种子培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(2)外植体预培养：将步骤(1)中种子萌发获得的小苗根据子叶、下胚轴、叶片、茎段切成1‑2cm的小块，用解剖刀划伤，接种到MS外植体培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下预培养1‑4天，所述MS外植体培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)细菌侵染：将步骤(2)中获得的预培养材料浸泡到发根农杆菌R1601、LBA9402,A4和15834的培养液中浸泡15分钟进行细菌侵染，其中发根农杆菌菌液的光密度范围为0.4‑1.0；(4)共培养：将步骤(3)获得的共侵染材料接种到MS共培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下共培养1‑4天，所述MS共培养基中添加0‑200umol/L乙酰丁香酮，30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)抑菌培养：将步骤(4)获得的共培养材料接种到抑菌培养基中，在培养温度23‑27℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天，所述抑菌培养基中添加300mg/L头孢噻肟，30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。