[发明专利]一种测定尿液中可替宁含量的方法

摘要

本发明公开一种测定尿液中可替宁含量的方法，包括以下步骤移取尿液于离心管，加入氘代内标，用乙腈稀释；将离心管置于涡旋振荡仪，涡旋振荡，静置；吸取上清液经有机相滤膜过滤，滤液待测；配制储备液和工作液，采用超高效液相色谱‑串联质谱测定。与传统的气相色谱‑质谱法比较，本发明采用乙腈直接稀释，涡旋振荡过滤进样的方式，简化了前处理过程，提高了分析灵敏度。本方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度及重复性好的优点。

主权项

一种测定尿液中可替宁含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a)移取尿液于离心管，加入氘代内标，用乙腈稀释；步骤b)将离心管置于涡旋振荡仪，涡旋振荡，静置；吸取上清液经有机相滤膜过滤，滤液待测；步骤c)用甲醇配置可替宁标准储备液，低温避光保存；取一定量的储备液，用甲醇稀释定容，制得可替宁工作液；用甲醇准确配置可替宁‑d3内标储备液，用内标储备液配制内标工作液，低温避光保存，使用前将其恢复到室温；用乙腈配制不同浓度的可替宁标准工作溶液；步骤d)超高效液相色谱‑串联质谱测定吸取配制好的不同浓度的可替宁标准工作溶液，注入UPLC‑MS/MS系统，按内标法以峰面积计算出样品待测液中可替宁含量；所述UPLC‑MS/MS系统的测定条件中：色谱条件：选用色谱柱Atiantis UPLC BEH Shield RPC18，规格为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A：体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B：0.1％甲酸甲醇溶液；流速0.8mL/min，柱温35℃，进样量5μL；梯度洗脱；梯度洗脱条件：0～1min,98％A～98％A；1.1～3.0min,2％A～2％A；3.01～4.0min,98％A～98％A；质谱条件：电喷雾离子源，喷雾电压(IS)2.6kV；离子化温度350℃；雾化气流量1000L/Hr；锥孔气流量50L/Hr；碰撞气流量为0.15ml/min；碰撞气为氩气，其余气体为氮气；驻留时间为30msec，正离子MRM模式采集，选取m/z 177.2/98.0作为定量离子对，m/z 177.2/80.1为确认离子对，m/z 180.2/80.1为对应的氘代内标离子对。