[发明专利]一种植物核糖体的制备方法

摘要

本发明公开了一种植物核糖体的制备方法，包括麦胚的制备、核糖体麦胚抽提物的制备步骤，具体包括取小麦种子，干燥粉碎过筛，收集麦粉颗粒，悬浮，挑选，洗涤，裂解，超声处理，震摇处理，干燥，置于离心管中，抽提，洗脱，纯化处理，作洗脱曲线，核酸琼脂电泳，鉴定洗脱液，确定含核糖体的麦胚抽提物并收集，得到目标物，置液氮中保存备用。本发明解决了核酸核糖体离体结合体系的构建及药物的抗病毒活性筛选中材料的来源与质量，本发明制备得到的植物核糖体质量纯净，纯度较高且提取完整，可用于病毒TMV‑RNA离体蛋白翻译体系，用于靶向性药物筛选,作为核糖体的一个来源。

主权项

一种植物核糖体的制备方法，其特征在于包括麦胚的制备、核糖体麦胚抽提物的制备步骤，具体包括：A、麦胚的制备：取小麦种子，干燥至含水量12%，粉碎过孔径1mm筛，再过孔径0.45mm筛，收集0.45mm筛上的麦粉颗粒，加入麦粉颗粒固液体积比2~5倍的悬浮液，悬浮液为环己烷‑四氯化碳溶液，悬浮得到悬浮颗粒，去除溶剂后挑选完整麦胚，完整麦胚进一步洗涤，洗涤后加入固液体积比8~12倍的无菌水，置于摇床上于温度3~5℃晃摇洗涤8~12min，洗涤2~4次，加入固液体积比1~3倍的裂解液，裂解液为NP‑40，超声处理，弃去裂解液，加入固液体积比8~12倍的DEPC处理水于摇床上震摇处理8~12min，处理2~4次，干燥，于3~5℃保存备用；B、核糖体麦胚抽提物的制备：称取A步骤制备的麦胚0.05~0.15g，置于DEPC处理过的离心管中，加液氮，研磨成粉末，加入0.5~1.5ml的核糖体抽提缓冲液和8~12μl购于promega公司的标准混合氨基酸，混摇使粉末分散，置于频率30Hz的振荡器上震荡抽提20~40s，于0~5℃静置2~4min，于3~5℃、30000g离心20~40min，上清液上Sephadex G‑25柱，用1×Buffer A洗脱，以1.5ml/管或0.5ml/管依次收集洗脱液，并将洗脱液于3~5℃、30000xg离心8~12min纯化处理，测定各管洗脱液260nm和280nm紫外吸收值，作洗脱曲线，以吸收峰作为不同组分的依据，对相应峰的洗脱液通过琼脂糖电泳和氯仿/酚法去蛋白后核酸琼脂电泳，鉴定洗脱液，确定含核糖体的麦胚抽提物并收集，得到目标物，置液氮中保存备用；所述核糖体抽提缓冲液为2×BufferA，配方具体为：40mM Hepes/KOH、120mM K(AC)2、5mM Mg(AC)2、2mM CaCl2、4mM DTT；所述1×Buffer A是核糖体抽提缓冲液2×Buffer A的倍比稀释。