[发明专利]一种肠道病毒多重RT-PCR试剂盒

摘要

一种肠道病毒多重RT-PCR试剂盒，涉及生物技术领域中的PCR试剂盒。本试剂盒包括M-MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、5xRT-PCR Buffer、阳性对照、阴性对照、随机引物、三对特异性引物、多重10xPCR Buffer、Taq酶；本试剂盒依据肠道病毒基因保守序列5’端非编码区设计通用引物：F1：5’-ACAAGCACTTCTGTTTCCCCGG-3’，F2：5’-GATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’；依据EV71病毒VP1基因保守序列设计引物；依据CA16病毒VP1基因保守序列设计引物。本发明测时间周期短、检测效率高；检测病毒特异性高，准确率高。

主权项

一种肠道病毒多重RT‑PCR试剂盒，其特征在于：本试剂盒包括M‑MLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、5xRT‑PCR Buffer、阳性对照、阴性对照、随机引物、三对特异性引物、多重10xPCR Buffer、Taq酶；依据肠道病毒基因保守序列5’端非编码区设计通用引物：F1：5’‑ACAAGCACTTCTGTTTCCCCGG‑3’     22bp，    F2：5’‑GATTGTCACCATAAGCAGCCA‑3’      21bp；    依据EV71病毒VP1基因保守序列设计引物：    EV71F：5’‑AGARAGYTCTATAGGRGAYAG‑3’   21bp，    EV71R：5’‑GGAGGGAGRTCTATCTCYCC‑3’    20bp；    依据CA16病毒VP1基因保守序列设计引物：    CA16F：5’‑AAGGGTAATGGARTGTGGTGAY‑3’  22bp，    CA16R：5’‑GTGTGTGTTGAACCATCACTC‑3’   21bp；    其中：R=A或G，Y=C或T；阳性对照：连接有设计肠道病毒、EV71、CA16引物的基因保守序列的pGBKT‑7克隆载体；③阴性对照：RNase Free H₂O；④5×RT‑PCR Buffer配制：    Tris‑HCl             250mM    KCl                  375mM    MgCl₂                                   15mM    DTT                   50mM    dNTP                  10mM    配置混合后于冰箱‑20℃保存；⑤多重10×PCR Buffer配制：       Tris‑HCl                100mM       KCl                     500mM       MgCl₂                                         25mM       dNTP                      2mM       Nonidet P40             0.8％       配置混合后于冰箱‑20℃保存。