[发明专利]一种麻疹病毒一步实时荧光定量RT-PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种麻疹病毒一步实时荧光定量RT-PCR试剂盒，涉及生物技术领域中的PCR试剂盒。本试剂盒包括麻疹病毒的一对特异性引物、一条特异性荧光探针、阳性对照、阴性对照、一步5×RT-PCR Buffer和Enzyme Mix；特异性引物F：5'-ACASRGTGATCAAARTGRRARYGAGCTC-3'，R：5'-GYCCTGCCATGGYYTGCAC-3'；特异性探针FP：FAM-ATCYGATRCAGTRTCAATT-MGB-NQF。本发明检测时间周期短、检测效率高；检测病毒特异性高，准确率高；在进行病毒定性分析的同时还能进行病毒定量分析；检测灵敏度比普通PCR和免疫学检测方法灵敏度高；操作简单、易于推广；实验结果重复性好。

主权项

 一种麻疹病毒一步实时荧光定量RT‑PCR试剂盒，其特征在于：本试剂盒包括麻疹病毒的一对特异性引物、一条特异性荧光探针、阳性对照、阴性对照、一步5×RT‑PCR Buffer和Enzyme Mix；①麻疹病毒的一对特异性引物依据麻疹病毒N基因序列设计特异性引物：F：5'‑ACASRGTGATCAAARTGRRARYGAGCTC‑3'，R：5'‑GYCCTGCCATGGYYTGCAC‑3'；②麻疹病毒的一条特异性荧光探针依据麻疹病毒N基因序列设计特异性探针：FP：FAM‑ATCYGATRCAGTRTCAATT‑MGB‑NQF；    ③阳性对照麻疹病毒标准品；④阴性对照RNase Free H₂O；⑤一步5×RT‑PCR Buffer配制：Tris·Cl           20mM    KCl                80mM（NH₄）₂SO₄                   80mM_{DTT                 1.5mMMgCl2              12mMdNTP               10mM ，配置混合后于冰箱‑20℃保存；⑥Enzyme Mix配制：    Tris·Cl           20mM    KCl                80mMDTT                 1mMEDTA                0.1mMNonidet P‑40        0.5％Tween 20            0.5％甘油               50％Taq酶               2.5U/ulM‑MLV酶             2.5U/ul，配置混合后于冰箱‑20℃保存。}