[发明专利]非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途

摘要

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了三套分别针对非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’-UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这三套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的三重荧光RT-PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸，可用于家猪及其相关样本中微量非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的核酸的同时检测。

主权项

一种非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光RT?PCR检测试剂，其特征在于，包括用于分别检测非洲猪瘟病毒CP530R基因、猪瘟病毒5’?UTR基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因的三对特异性引物、三条特异性探针和三个阳性对照，扩增目标长度分别为73bp、77bp和95bp，引物和探针序列为：非洲猪瘟病毒上游引物：CP530R?F:5’?GTGTCAATAATCCCTATCTTGCCA?3’??????????SEQ?ID?NO.1下游引物：CP530R?R：5’?AACTCGGTGGGATGGTTGAG?3’?????????????SEQ?ID?NO.2探针：CP530R?P:5’?FAM?TCCTTGCTGTCTTTCTTGTC?3’?MGB??????????SEQ?ID?NO.3阳性对照：ACTGGTGTAGTGTCAATAATCCCTATCTTGCCAAATCAGTTTCCTTGCTGTCTTTCTTGTCGCTCAACCATCCCACCGAGTTTATTAAGGTACTGCCGCTTATAGAC；??????????????SEQ?ID?NO.4猪瘟病毒上游引物：CSFV?5’UTR?F:5’?GTTCGACGTGAGCAGAAGCC?3’?????????SEQ?ID?NO.9下游引物：CSFV?5’UTR?R:5’?CCGCTAGGGTTAAGGTGTGTC?3’????????SEQ?ID?NO.10探针：CSFV?5’UTR?P:5’?VIC?ACCACCATAGCAATGAGCAAGG?MGB?3’???????SEQ?ID?NO.11阳性对照：CTGGGTGGTCTAAGTCCTGAGTACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAGCCCACCTCGAGATGCTATGTGGACGAGGGCATGCCCAAGACACACCTTAACCCTAGCGG?????????????????????????????????????????????????????????????SEQ?ID?NO.12猪繁殖与呼吸综合征病毒上游引物：PRRSV?NSP2?F:5’?CTCACAGACGGAATATGAGGC?3’?????????SEQ?ID?NO.17下游引物：PRRSV?NSP2?R:5’?CACTCAGGACTTCCTCAGCTTC?3’????????????SEQ?ID?NO.18探针：PRRSV?NSP2?P:5’?NED?CACCATCGCAGAAC?MGB?3’????????????????SEQ?ID?NO.19阳性对照：GATGAGCCTCTGGATTTGTCTGCGTCCTCACAGACGGAATATGAGGCTTTCCCCCTAGCACCATCGCAGAACATGGGCATCCTGGAGGCGGGGGGGCAAGAAGCTGAGGAAGTCCTGAGTGAAATCTC?????????????????????????????????????????????????????????????SEQ?ID?NO.20。