[发明专利]一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒纯化及其疫苗制备方法有效
| 申请号： | 201510193437.6 | 申请日： | 2015-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN104873966B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 宣春玲;钱泓;吴有强;吕朋;吴素芳;张屹峰;查银河;汪正亮 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/12 | 分类号： | A61K39/12;C07K14/01;C12N15/866;C12N15/34;C12N7/02;A61P31/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗的制备方法和应用。本发明所提供的制备方法包括以下步骤：将人工优化的编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因克隆到杆状病毒载体中，通过转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒。利用重组杆状病毒感染high five细胞，使Cap蛋白在细胞中大量表达。本发明还公开了一种快速简便纯化病毒样颗粒的方法。本发明所提供的纯化方法包括以下步骤：离心收集high five细胞，以冰预冷PBS重悬细胞，使用细胞均质仪将细胞悬液裂解为较澄清的液体。通过凝胶过滤层析方法对病毒样颗粒进行纯化。使用本发明所提供的方法能够快速从复杂的细胞裂解液中特异的纯化到病毒样颗粒蛋白，纯度达到90％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 种猪 圆环 病毒 颗粒 纯化 及其 疫苗 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒纯化及其疫苗制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1.1猪圆环病毒2型的衣壳蛋白Cap其特征在于如SEQ ID NO.1所示的氨基酸组成的蛋白质；/n1.2将人工改造的编码猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的orf2基因克隆到昆虫杆状病毒表达系统中得到重组杆状病毒BV-PCV2-CAP；/n1.3将重组杆状病毒BV-PCV2-CAP进行扩大培养，通过凝胶过滤层析纯化得到目的蛋白；/n1.4将Cap蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后得到PCV2病毒样颗粒疫苗；/n其中猪圆环病毒2型Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，经人工改造的Cap蛋白核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n其中，步骤1.3所述的扩大培养为：重组杆状病毒质粒bacmid-PCV2-CAP转染处于对数期的sf9细胞，细胞密度为1.5-2.5×10
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江海隆生物科技有限公司，未经浙江海隆生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201510193437.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
