[发明专利]利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法

摘要

本发明涉及一种利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于：利用灰浅红链霉菌（Streptomyces griseorubens）LH-3作为菌种，以制浆黑液半纤维素作为发酵产酶碳源；所述的灰浅红链霉菌是从微生物保藏中心或市场购买，经过驯化培养，使其适应制浆黑液半纤维素，诱导灰浅红链霉菌产木聚糖酶，定向制备无纤维素酶的木聚糖酶；所述的木聚糖酶制备过程包括如下步骤：（1）灰浅红链霉菌种保藏；（2）菌株的选育；（3）灰浅红链霉接种培养；（3）接种发酵培养和（4）酶液制备。本发明菌株营养要求简单、培养方法简便易行，这些优良特性为工业化生产提供了有利条件。

主权项

一种利用制浆黑液半纤维素制备木聚糖酶的方法，其特征在于，利用灰浅红链霉菌（Streptomyces griseorubens ）作为菌种，以制浆黑液半纤维素作为发酵产酶碳源；所述的灰浅红链霉菌是从微生物保藏中心或市场购买，经过驯化培养，使其适应制浆黑液半纤维素，诱导灰浅红链霉菌产木聚糖酶，定向制备无纤维素酶的木聚糖酶；制备过程包括如下步骤：（1）灰浅红链霉菌种保藏：将灰浅红链霉（Streptomyces griseorubens ）菌株接种在斜面培养基上，在28～30℃恒温箱中培养7天后，置于冰箱内4℃以下保藏；（2）菌株的选育：将保藏的菌种涂布于固体平板培养基上，在pH8.0、37℃的条件下培养3‑7天，根据透明圈的大小挑选菌株，挑取透明圈大且明显的菌落转接到斜面培养基，再进行驯化培养；（3）灰浅红链霉接种培养：取出保藏的菌种，解冻后量取100μL菌液在无菌条件下接种于250mL三角培养瓶中，三角培养瓶内装有50mL种子培养基，然后在摇床转速为160r/min，pH 8.0，温度为37℃的条件下培养24小时，得灰浅红链霉菌种备用；命名该菌种为灰浅红链霉菌LH‑3；（4）接种发酵培养：将种子培养基菌种的菌液接种于液体发酵培养基中进行摇瓶培养，20%装液量，14%接种量，培养条件为：温度为33～35℃，pH9.0，摇床转速为160r/min，培养4天；（5）酶液制备：将发酵培养液经离心，取上清液，用滤纸过滤上清液，即得粗酶液。