[发明专利]一种检测皮层神经元轴突生长导向的方法及其应用

摘要

本发明涉及一种检测皮层神经元轴突生长导向的方法。在模具上用聚二甲基硅氧烷制备带有显微通道的印章，然后将印章扣在包被多聚赖氨酸的玻片上，从通道的一边加入含有导向因子和荧光分子的溶液，溶液进入孔道形成间隔相等的平行条带；在包被好荧光条带的玻片上进行神经元培养，观察新生的轴突是否进入含有导向因子的条带，并计算二者的比率，进行统计分析。本发明的方法不仅有助于理解脑内神经回路的形成机制，而且对轴突变性和轴突损伤类疾病具有潜在的治疗价值。在本发明的基础上，建立疾病模型，通过外源性给予细胞分泌因子，模拟脑内分泌因子在时间与空间上的特异性表达，诱导神经元的功能重建，为治疗以上疾病的临床转化医学奠定实验基础。

主权项

一种检测皮层神经元轴突生长导向的方法，其特征在于，包括如下步骤：a.制备表面带有微通道的PDMS印章将PDMS的预聚体与偶联剂搅拌混合，抽真空除气后倒入浇注模具，加热至80℃并保温1h固化，脱模得到PDMS印章；所述的PDMS印章下表面带有间隔相等的平行微通道；b.条带包被取消毒的玻片放入培养皿中，加入多聚赖氨酸进行包被，将制备好的PDMS印章扣在多聚赖氨酸包被的玻片上，将需要研究的导向因子用FITC‑BSA稀释到作用浓度，然后加入到印章的微通道一端，于通道另一端抽吸使溶液充满整个通道，待溶液干后，移除印章，在玻片上形成含有导向因子的平行条带；c.神经元种植将步骤b中制得的玻片置于冰上，玻片上加入BD Matrigel，在BD Matrigel上进行神经元培养；d.染色与分析使用免疫荧光技术进行染色，观察新生的轴突是否进入含有导向因子的条带，计算新生的轴突中进入含有导向因子的条带的比例，并进行统计分析该种导向因子对轴突具有吸引还是排斥的作用；所述PDMS印章下表面的通道宽为60μm、高为100μm，每个平行的通道之间间隔为90μm。