[发明专利]净化苯巴比妥和莱克多巴胺复合免疫亲和柱及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种净化苯巴比妥和莱克多巴胺复合免疫亲和柱及其制备方法与应用。本发明采用4％的柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与本发明制备的苯巴比妥抗体和市场上购买的莱克多巴胺抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱。当含有苯巴比妥和莱克多巴胺的样品通过免疫亲和柱时，免疫吸附剂就会特异性的吸附苯巴比妥和莱克多巴胺，其他的杂质则流出免疫亲和柱，然后用甲醇将苯巴比妥和莱克多巴胺从柱子中洗脱下来，样品得到了很好的净化。建立免疫亲和柱净化-液相色谱法检测苯巴比妥和莱克多巴胺，使检测快捷，精确，安全。

主权项

净化苯巴比妥和莱克多巴胺复合免疫亲和柱，其特征在于，制备方法如下：a)基质制备称取1g琼脂糖凝胶基质粉末，溶于1mmol/L HCl中，然后置于烧结玻璃过滤器中使用1mmol/L HCl洗涤15min；b)配体偶联使用偶联缓冲液0.2mol/L NaHCO₃pH8.3溶解待偶联的抗苯巴比妥单克隆抗体和抗莱克多巴胺单克隆抗体，获得抗体溶液，迅速将步骤a)活化的琼脂糖凝胶基质转移到所述抗体溶液中，充分混匀上述的混和物2‑4h；c)配体封闭封闭所有残留的活性基团，转移经步骤b)处理的琼脂糖凝胶基质至0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液中，室温条件下静置2‑4h；d)除去偶联后未偶联上的多余的配体依次用0.1mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液对经步骤c)处理后的琼脂糖凝胶基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；e)装柱用5倍所述琼脂糖凝胶体积的0.01％NaN₃‑PBS洗涤，并使用0.01％NaN₃‑PBS保存，然后装柱。