[发明专利]一种软鳍新光唇鱼肌肉细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种软鳍新光唇鱼肌肉细胞系的构建方法，该构建方法包括如下步骤：1)软鳍新光唇鱼肌肉的获取：高锰酸钾和酒精联合对鱼体进行消毒；2)原代培养：采用含有硫酸卡那霉素、硫酸链霉素以及两性霉素B的DMEM培养液进行培养；3)传代培养：传至第10代时，细胞培养液换成基础培养液，所述软鳍新光唇鱼肌肉细胞系建立成功。本发明的构建方法所获得的软鳍新光唇鱼肌肉细胞系形态为不规则多角形，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，满足了对软鳍新光唇鱼种质资源保存和理论研究及应用的需要。

主权项

一种软鳍新光唇鱼肌肉细胞系的构建方法，该构建方法包括如下步骤：1)软鳍新光唇鱼肌肉的获取：先用5‑10mg/L高锰酸钾浸泡软鳍新光唇鱼10‑20分钟，对鱼进行整体消毒；整体消毒后，以75％酒精再次消毒鱼体后，加入平衡盐溶液消毒液浸泡肌肉组织；浸泡15分钟后，将肌肉组织用消毒液清洗；2)原代培养：将所述肌肉组织剪成组织小块，并将其接种于细胞培养瓶中，在22‑28℃培养箱中倒置过夜，次日再加入原代培养液，在22‑28℃培养箱中启动原代培养，每三天半量更换培养液，第7‑10天细胞开始从组织块中迁移，20‑40天长成细胞单层；3)传代培养：原代肌肉细胞铺满瓶底80％后开始传代，先吸出培养瓶中的原代培养液，以含0.2％的胰蛋白酶的胰酶消化法传代悬起细胞，首次传代按1:1传，此后按1:2进行传代，于22‑28℃培养箱中继续培养；每5天传代一次，传至第10代时，细胞培养液换成基础培养液，所述软鳍新光唇鱼肌肉细胞系建立成功。