[发明专利]一种GelGreen染料在氯化铯密度梯度混合液中对DNA染色的方法有效
| 申请号： | 201510205804.X | 申请日： | 2015-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN104762407B | 公开（公告）日： | 2017-08-22 |
| 发明（设计）人： | 高景峰;潘凯玲;樊晓燕;司春英;李洪禹;李婷;孙丽欣 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司11335 | 代理人： | 陈圣清 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种GelGreen染料在氯化铯密度梯度混合液中对DNA染色的方法，属于分子生物学技术领域。所述方法包括以下步骤步骤1，采集环境样品并提取环境总DNA；步骤2，配制环境总DNA‑氯化铯混合液，并加入GelGreen染料；步骤3，将加入所述GelGreen染料的混合液进行超高速离心，得到密度梯度混合液；步骤4，将所述密度梯度混合液在激发波长为488nm的荧光透射仪的照射下进行分层，用注射器抽取相应层的密度梯度混合液；步骤5，对各层密度梯度混合液中的DNA进行细菌16S rRNA基因实时荧光定量PCR分析。本发明基于GelGreen染料在氯化铯密度梯度混合液中对DNA染色，大大提高了环境DNA在超高速密度梯度离心后的氯化铯密度梯度混合液中的检测灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gelgreen 染料 氯化铯 密度 梯度 混合液 dna 染色 方法 | ||
【主权项】：
一种GelGreen染料在氯化铯密度梯度混合液中对DNA染色的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，采集环境样品，用土壤DNA提取试剂盒提取环境总DNA；步骤2，配制环境总DNA‑氯化铯混合液，并加入GelGreen染料；其中，所述的环境总DNA‑氯化铯混合液为：将环境总DNA与TE缓冲液或GB缓冲液配制成混合液，加入CsCl固体，涡旋混匀后再加入1g/mL的CsCl溶液和所述GelGreen染料，再将所述环境总DNA‑氯化铯混合液的浮力密度调节为1.72g/mL；所述混合液中GelGreen染料的浓度为15X；步骤3，将加入所述GelGreen染料的混合液进行超高速离心，得到密度梯度混合液；步骤4，在激发波长为488nm的荧光透射仪的照射下，鉴定DNA在所述密度梯度混合液中的位置，并用注射器对相应的密度梯度混合液进行分层、回收；其中，DNA的检出限为0.1μg，DNA用量为0.5μg时，目标条带清晰；步骤5，对各层密度梯度混合液中的DNA进行细菌16S rRNA基因实时荧光定量PCR分析。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京工业大学，未经北京工业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201510205804.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
