[发明专利]抗艾滋病药物筛选方法

摘要

本发明公开了一种抗艾滋病药物筛选方法，以PBS为模板、以PBS互补的DNA为引物，70℃，反应10min，依次加入缓冲液，水，DTT,dNTPS、药物、HIV RT，template/primer的浓度为1uM，50mM pH8.0 tris-HCl，60mM KCl，8mM MgCl₂，1mM DTT，500mM dNTPS，0.5U HIV RT，于37℃反应1h，通过丙烯酰胺电泳分离，Storm 840扫描，定量分析，计算药物的HIV RT抑制率。利用该方法能够方便、快速地筛选抗HIV-1药物，为抗HIV-1药物提供新途径。

主权项

抗艾滋病药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备模板和引物：在对HIV‑1反转录起始被设计在RDDP活性和RT RNase H裂解活性的药物靶点，以RNA的PBS为模板、以PBS互补的DNA为引物；所述的PBS模板是2uL 1mM 21 nt HIV RNA template( 3’‑ACAAGC CCGCG GUGAC GAUCU‑5’)，所述的DNA引物为1uL 1mM 11 nt DNA primer (5’‑γ‑³²P‑TGT TCG GGC GCC A‑3’)；（2）依次加入97 μL H₂O，70℃10 min，缓慢冷却到室温；（3）取template/primer溶液1μL，依次加入缓冲液，水，DTT, dNTPS、药物、HIV RT；（4）制备10μL 反应体系，template/primer的浓度为1uM，50 mM pH 8.0 tris‑HCl， 60 mM KCl，8mM MgCl₂, 1mM DTT，500 mM dNTPS，0.5 U HIV RT，于37℃反应1h；（5）通过丙烯酰胺电泳分离，Storm 840扫描，定量分析，计算药物的HIV RT抑制率。