[发明专利]将脐带间充质干细胞诱导分化成少突胶质细胞的方法

摘要

公开了将脐带间充质干细胞诱导分化成少突胶质细胞的方法。该方法采用预诱导和诱导二步结合法，并配制了优化的预诱导培养液和诱导培养液，其中通过加入皂苷类化合物作为诱导物，成功诱导脐带间充质干细胞分化成少突胶质细胞，并且分化比例较高。

主权项

1.一种将脐带间充质干细胞诱导分化成少突胶质细胞的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1) 脐带间充质干细胞的培养和扩增：获得脐带间充质干细胞单体，将脐带间充质干细胞单体按1-5×105/ml接种于脐带间充质干细胞培养液中，在35-38℃、体积分数为5-10%的CO2饱和湿度培养箱内培养，每3-8天换液传代一次，得到培养的细胞；其中所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12基本培养基，2％B27，2-4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，EGF20-40ng/ml，bFGF 20-30ng/ml，80-90U/ml青霉素，和60-70μg/ml链霉素；以及(2) 预诱导分化：将步骤(1)得到的培养细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养3天后更换预诱导培养液进行培养，3天后半量换液，第3-4天时终止诱导；其中在该步骤的培养过程中，在培养液中添加皂苷类诱导物，并且保持培养液中所述诱导物的浓度为5-10μg/mL； 并且，其中所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nM～50nM的维生素C，10-20U/ml人白细胞抑制因子，15-25μg/L bFGF，15-25μg/L EGF，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素，所述预诱导培养液另外含有0.01M磷酸盐进行缓冲；所述皂苷类诱导物为下面结构式（I）～（III）任一所示：（I）（II）（III）和(3)诱导分化：将步骤(2)得到的细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行诱导培养，3天后半量换液，第3-6天时终止诱导，得到少突胶质细胞；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nmol～50nmol的维生素C，30nM～40nM的维生素B1，0.01-0.02％的二甲基亚砜，0.1mM 2-β-巯基乙醇，10-20U/ml人白细胞抑制因子，10-30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，和80-100μg/ml链霉素。