[发明专利]霍氏肠杆菌CL2013及制备六价铬修复菌剂的方法

摘要

一株从铬渣堆场土壤中分离筛选出来的霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei）CL.2013菌株于2015年1月27日保藏，保藏号为CGMCC No.10451。该菌株在LB培养基上培养，细胞形状为杆状，革兰氏染色阴性；培养3天，菌落颜色为乳白，菌落形态为圆形、光滑，通过生理生化反应和分子生物学鉴定确定该菌株为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)。霍氏肠杆菌CL.2013菌株对六价铬具有强大的还原作用。本发明还公开了用霍氏肠杆菌CL.2013菌株和万寿菊加工废液与废渣制备六价铬修复菌剂的方法，其方法简单、成本低廉，没有二次污染，使用方便，具有广阔的市场前景。

主权项

1.一种用霍氏肠杆菌CL.2013菌株制备六价铬修复菌剂的方法，所述的霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei）CL.2013菌株于2015 年1月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10451，所述的制备方法包括如下步骤：（1） 制备菌种活化培养基 在LB培养基中添加葡萄糖1g/L，灭菌15‑30min，待用；（2）制备活化种子 将保藏在斜面试管中的霍氏肠杆菌（Enterobacter hormaechei） CL.2013菌株接入（1）制备好的培养基中，在28 ‑35℃、120‑180r/min振荡培养12‑16h，得到活化种子；（3） 制备液体种子培养液 用氢氧化钠水溶液调节万寿菊提取叶黄素的加工废水的pH 到6.5‑7.5，于115 ‑121℃灭菌15‑30min；（4）制备液体种子 取（3）制备的培养液中接种（2）制备的活化种子，接种量为8%‑10%，于30‑37℃、120‑200r/min振荡培养24‑48 h，得到液体种子；（5） 制备发酵菌液 在（3）制备的培养液中接种体积比为2％‑15％（4）制备的液体种子，于25‑35℃，通无菌空气培养12‑48 h，当活菌数达到5×108CFU/ ml时，得液体发酵菌液；（6） 制备万寿菊花渣生物炭 将提取完叶黄素的万寿菊花渣晾干后粉碎至20‑100目，放入管式反应炉内，在加热前，往炉内通20‑30min气速为250cm3/min的氮气，使反应炉内为无氧环境，在升温速率5℃ /min 的条件下加热至300‑600℃，保持3‑6h，随后冷却至室温，得到黑色生物碳；（7）制备六价铬修复固态菌剂 以制备好的生物碳为载体，按照发酵菌液∶生物碳为1︰1.2‑5的质量比，将（5）制备发酵菌液添加到（7）制备的生物碳中，充分混合均匀，通风干燥至菌剂含水量在30％以下，包装，存放在阴凉干燥处，得到六价铬修复固态菌剂。