[发明专利]一种RGD多肽靶向的超小四氧化三铁MRI阳性纳米探针的制备方法

摘要

本发明涉及一种RGD多肽靶向的超小四氧化三铁MRI阳性纳米探针的制备方法，包括经一步溶剂热法合成得到表面柠檬酸钠稳定的超小Fe3O4纳米颗粒，然后将NH2‑PEG‑RGD修饰到纳米颗粒表面，得到RGD靶向的超小四氧化三铁MRI阳性分子探针。修饰了PEG‑RGD的超小四氧化三铁纳米探针在小鼠体内具有长循环时间，并且在细胞水平和动物水平实现了对表面αvβ3整合素高表达癌细胞(U87MG细胞，人脑胶质瘤细胞)和皮下移植瘤的靶向T1加权增强MRI。本发明制备的Fe3O4纳米颗粒能够长时间稳定分散于水溶液中，不会出现团聚现象。本发明制备方法简单，成本低，具有产业化和商业化潜能。

主权项

一种RGD多肽靶向的超小四氧化三铁MRI阳性纳米探针的制备方法，包括：(1)将六水合氯化铁溶解在一缩二乙二醇DEG中，然后加入柠檬酸钠Na3Cit，在空气气氛下60～80℃搅拌，柠檬酸钠完全溶解后加入无水醋酸钠，搅拌至醋酸钠粉末完全溶解，将溶液转移至高压釜中，180～200℃反应3～4小时；自然冷却至室温，离心，弃上清液，用无水乙醇回溶，重复操作2～3次，将沉淀物烘干，得到超小四氧化三铁纳米颗粒；其中，六水合氯化铁、一缩二乙二醇、柠檬酸钠与无水醋酸钠的配比为1.081～1.09g：38～40mL：0.47～0.50g：1.312～1.33g；(2)分别将Mal‑PEG‑NH2和巯基化的RGD溶解于DMSO中，然后将溶解于DMSO中的巯基化的RGD逐滴加入到Mal‑PEG‑NH2的DMSO溶液中，持续搅拌反应60～72小时，反应结束后透析，真空冷冻干燥，得到RGD‑PEG‑NH2；其中，Mal‑PEG‑NH2与RGD的摩尔比为1.5～2：1～1.5；(3)将步骤(1)中的超小四氧化三铁纳米颗粒分散在DMSO中，超声，分别将EDC和NHS的DMSO溶液加入到超小四氧化三铁纳米颗粒的DMSO的分散液中，搅拌反应2～3小时，将反应结束后的溶液逐滴加入到步骤(2)中RGD‑PEG‑NH2的DMSO溶液中反应60～72小时，得到Fe3O4‑PEG‑RGD，透析，然后真空冷冻干燥，即得Fe3O4‑PEG‑RGD；其中，超小四氧化三铁纳米颗粒、EDC与NHS的质量比为160～168：134～144：65～70。